提高春小麦幼胚离体培养中愈伤组织诱导及分化效率研究.pdfVIP

提高春小麦幼胚离体培养中愈伤组织诱导及分化效 率的研究 1 2 3 4 1,* 张金林 ，石明辉 ，许瑞 ，李唯 王锁民 1 兰州大学草地农业科技学院 农业部草地农业生态系统学重点开放实验室，兰州 730020 2 甘肃省酒泉市农科所，酒泉 735000 3 甘肃中医学院，兰州 730020 4 甘肃农业大学生命科学技术学院，兰州 730070 *通讯作者：E-mail: jlzhang@ 摘 要：为了提高春小麦生物技术育种中愈伤组织诱导和植株再生效率，本文以甘肃省 7 个春小麦品种为试验材料，探讨了接种方式、基因型、胚龄和植物生长调节剂等因素对幼胚 培养中愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明：供试春小麦品种出愈率不受盾片放置方向的 影响，而盾片向上放置的分化率明显大于盾片向下放置的；春小麦幼胚离体培养的有效胚龄 期为14~20d，最适宜的胚龄期为16d；基因型对愈伤组织诱导无影响，但对愈伤组织再生能 力有极其重要的影响；随2,4-D 浓度的增加春小麦幼胚分化率呈单峰曲线变化，且品种间差 异很大，对大多数品种而言，适宜的2,4-D 浓度为1~6 mg/L。0.2 mg/L NAA 和0.2 mg/L IAA 能有效地诱导芽快速生根，生根率分别达到83.8%和55.1%。 关键词：春小麦；愈伤组织诱导；芽分化；植株再生；效率 中图分类号：S5035.3 1. 引言 随着生物技术的迅速发展，运用基因手段进行品种改良日益受到重视。利用植物体细胞 培养技术诱导产生突变体，或建立转基因受体系统的研究已取得了一定的成就，积累了大量 的成熟经验。在几种主要的禾本科作物中，小麦体细胞组织培养的成功虽然比玉米和水稻略 晚一些，但据近年的报道，用小麦未成熟胚、幼穗、嫩叶、种子、成熟胚、胚轴、顶端分生 组织、胚芽鞘的节或根等作外植体，都已获得成功[1~4] 。研究表明，上述各类体细胞组织中 以幼胚作外植体最为实用，具有取材方便，操作简便，便于诱变处理，诱导分化率高，接种 与出苗能够配合小麦生长季节等特点。其中幼胚作为组织培养的外植体已受到人们的广泛重 视。这一技术不仅是取得远缘杂交的有效方法，而且也为遗传学研究开辟了新途径[4~6] 。利 用小麦幼胚离体培养技术进行小麦育种具有投资少、见效快、可大大缩短育种年限等优点， 是当今世界小麦育种研究中一个新的开发领域[7] 。但小麦幼胚离体培养再生频率低(远低于 水稻) ，而且不同基因型之间还存在很大差异，有些基因型特别难于再生[8~10] ，这都严重妨 碍了小麦基因工程研究工作的顺利开展。因此，研究小麦组织培养条件和植株再生频率的影 响因素依然是小麦生物技术育种中有待于解决的重要课题。本文以7 个春小麦品种为实验材 料，探讨了接种方式、基因型、胚龄、植物生长调节剂及其他处理对幼胚培养中愈伤组织诱 导及分化的影响。 基金项目: 兰州大学交叉学科青年创新研究基金 (LZU200516)和教育部新世纪优秀人才支持计划 (NCET-05-0882) -1- 2. 材料与方法 2.1 试验时间及地点 研究田间试验于 1999 年在甘肃农业大学农学院植物生理生化研究室试验田进行，室内 试验在植物组织培养试验室进行。 2.2 试验材料 供试春小麦(Triticum aestivum L.) 品种有红农1 号、永良4 号、甘春20 号、陇春16 号、 定西24 号、定西33 号和定西35 号等7 个品种，均由甘肃农业大学作物栽培与耕作教研室 提供。 2.3 外植体的获得 幼胚材料来源于开花后 14~26d 的春小麦幼穗，先用流水冲洗30min，无菌条件下70% 的乙醇消毒2min ，无菌水冲洗2~3 次，再用0.1% 的氯化汞消毒12 min，无菌水冲洗3~4 次。 用镊子和解剖针剥开颖壳，取