利用单细胞PCR方法生产人源化单克隆抗体的探索.pdfVIP

摘要 摘要 目的：抗体在免疫系统的功能中扮演着极为重要的角色。如何有效快速地生 杂交瘤单克隆抗体生产方法以来，生产单克隆抗体的技术不断发展，至今 已经有多种有效的生产单克隆抗体的方法，如杂交瘤技术，噬菌体展示技 术等等。目前，基因工程抗体的研究非常火热，而且在实际生产中已经得 到了应用。本文中，作者探讨一种非常新颖有效的人源化单克隆抗体生产 的方法，揭示出这种方法的广阔前景。 方法：本研究中的生产完全人源化单克隆抗体的方法是基于目前流行的基因 工程抗体技术和单细胞PCR技术进行的。通过从免疫完成的患者体内取出外周 血，分离外周血中的B细胞，并根据不同的实验课题特征分选出不同亚群的B 细胞，将B细胞梯度稀释成单位体积1个细胞，然后将单位体积的细胞悬液加入 到96孔细胞板中，直接裂解细胞，加入PCR体系进行多轮PCR以扩增出抗体分 子的可变区。然后将此可变区克隆进包含有抗体其他部分基因的载体，共转染构 建完成的轻链和重链载体进293T细胞，一定时间的培养后，收集细胞培养上清， 检测并分离其中的抗体。 结论：通过本研究的探索，我们发现用单细胞PCR的办法生产全人源化单克 隆抗体的办法完全可行。通过