解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭小鼠肝细胞FLIP蛋白表达影响的研究.pdfVIP

陕西中医 2010年第 31卷第 1期 111 · 实验 研 究 · 解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭小 鼠肝细胞 FLIP蛋 白表达影响的研究 陈月桥 毛德文 余 晶 黄古叶 广西中医学院第一附属 医院肝病治疗中心(南宁 530001) 摘 要 目的：探讨解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭 小鼠肝细胞凋亡及凋亡抑制蛋白FLIP的影响，进 而揭示其治疗肝衰竭的分子机制。方法：将 昆明小鼠随机分为空白组、模型组、解毒化瘀颗 粒组、安宫牛黄丸组、乳果糖组，用D—GaIN+LPS腹腔注射构建急性肝衰竭的小鼠模型， 观察各组小鼠存活率；HE染色法和TUNEL法观察肝组织的病理变化及检测肝细胞凋 亡情况；免疫组化法检测FLIP蛋白在肝组织中表达。结果 ：成模后 48h存活率解毒化瘀 颗粒组高于其他药物组 ；肝组织HE染 色镜下所见的坏死细胞 以点状坏死为主 ，程度 比模 型组及其它药物干预组轻微；TUNEL法检测结果显示：解毒化瘀颗粒组肝细胞凋亡指数 明显减少，与其余药物干预组及模 型组比较有显著性差异 (P0．01或P0．05)；免疫组 织化学染色结果显示：凋亡抑制蛋 白FLIP在解毒化瘀颗粒组肝组织 中表达量明显升高， 而在其他药物干预组及模型组中则呈低表达(P0．01或P0．05)。结论 ：解毒化瘀颗粒 能上调 内毒素肝衰竭模 型肝细胞浆 中FLIP的表达，并发挥抑制凋亡效应。提示 阻断 FADD凋亡信号传递，有可能是解毒化瘀颗粒防治急性肝衰竭的机制之一。 主题词 肝衰竭 ／中医药疗法 存 活率 细胞凋亡 小鼠 @FLIP 免疫组织化学 【中图分类号1 R575．3 【文献标识码】 A 【文章编号1 1000—7369(2010)01—01¨一O3 急性肝衰竭病情重、预后差，其发病机制 目前 尚不十分清 1．2 试 剂 氨基半乳糖 D—GalN (由sigma公司提供 ， 楚。临床上虽有肝移植和人工肝等各种治疗措施 ，但病死率仍 产 品批号 ：G0500)，内毒素脂 多糖 LPS (由sigma公司提供 ，产 高达 7O _1]。近年来研究发现 ，肝细胞凋亡是肝衰竭 的重要发 品批号 ：L2880cat．No．L8880)。免疫组化 ：过氧化酶阻断剂 、正 病机制之一 ，细胞发生凋亡 的中心环节是激发 了以蛋 白酶组成 常非免疫 山羊血清、正常非免疫兔血清、生物素标记 的羊抗 鼠 的级联反应 ，其 中胞浆信号分子 FADD是最重要的凋亡信号蛋 IgG、生物素标记的羊抗兔 IgG、生物素标记的兔抗羊IgG、DAB 白，FLIP被认为是抑制 FADD信号传递 的特异性凋亡调节蛋 kit(20*)购 自福建迈新生物技术开发有 限公司 ；FLIP抗体 以 白_2]，FLIP在细胞凋亡过程 中起着关键调节作用 。因此 ，阻断 及抗体稀释液购 自北京 中杉金桥生物技术有限公司 。 细胞凋亡信号传导干预肝细胞凋亡 的发生对防治急性肝衰竭 2 方 法 的具有重要 的现实意义 。解毒化瘀颗粒是我院用于治疗肝衰竭 2．1 动物分组及给药 160只 SPF级 昆明小 鼠，随机分 的复方 中药制剂 ，在临床上运用可 以有效地改善肝衰竭 的症 为空 白组 (16只)、模型组 (36只)、解毒化瘀颗粒组 (36只)、乳 状l3]，但其作用机制 尚未完全 阐明。有鉴于此 ，本实验用 D— 果糖组 (36只)、安宫牛黄丸组 (36只)，雌雄各半 。解毒化瘀颗 GaIN+LPS联合腹腔注射建立急性肝衰竭模型，探讨解毒化 粒组给予 57．55g生药 ／kg、乳果糖组参照文献 给予 3．5g／ 瘀颗粒对急性肝衰竭小 鼠肝组织 中FLIP表达 的影 响，以进一 kg、安宫牛黄丸组参照文献r7给予 1．5g／kg。使用时 ，用蒸馏水 步揭示该方治疗急性肝衰