抗菌肽Rs-AFP2的原核表达及抑菌活性.pdfVIP

植物遗传资源学报 2010，11(1)：84—88 JournalofPlantGeneticResources 抗菌肽 Rs．AFP2的原核表达及抑菌活性 路 妍 一，刘宝业 ，井金学 ，张增艳 (西北农林科技大学植物保护学院，陕西杨凌712100；中国农业科学院作物科学研究所／农作物 基因资源 与基凶改 良围家重大科学工程．北京 100081) 摘要 ：为 了明确人 ．Y-合成的萝 卜抗菌肽 Rs．AFP，基 因编码产物是否对一些重要农作物病原真菌有抑制作用，本文将该基 因编码序列亚克隆到原核表达载体 pGEX一4T．1上 ，构建成 GST．Rs—AFP，融合蛋 白表达载体 。经异丙基-一D一硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导，获得 了以包涵体形式表达 的GST．Rs—AFP，重组蛋 白。经过裂解 、洗涤、溶解 、复性、离心等处理，获得 了纯化的 GST—Rs—AFP，融合蛋白。对重要作物病原真菌进行体 外抑 菌分析的结果表 明，Rs—AFP，可以显著抑制 水稻纹枯病 菌、小麦纹枯 病菌、小麦根腐病菌、棉花黄萎病菌、小麦赤霉病菌的菌丝生长 ，说 明凰．4 ，可作为上述植物病害抗性基 因育种的潜在基 因。 关键词 ：抗菌蛋白Rs—AFP，；复性 ；抑制真菌；植物病原真菌 ExpressionofRs—AFP2inEscherichiacoliandItsAntifungalAssay LU Yan一，LIU Baoye ，JING Jin—xue ，ZHANG Zeng—yan (CollegeofPlantProtection，NorthwestAF University，Yangling712100；NationalKeyFacilityf~rCropGene ResourcesandGeneticImprovement~InstituteofCropSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100081) Abstract：Rs—AFP2isanantifungalpeptidefrom radish(Raphanussativus)．Inthisstudy，thefullcDNAse— quenceofRs—AFP genewassynthesized，andwassub—clonedin—flametothe3一terminusoftheORFofGlutathione S-transferase(GST)intheprokaryoticexpressionvectorpGEX一4T一1．ThisallowedtherecombinantproteinGST— Rs—AFP2tobehighlyexpressed in cellsofEscherichia coil．The recombinantprotein GST—Rs—AFP2could be ex— pressedintheform ofinclusionbodiesafterinductionbyisopropyl—B—D—thiogalactoside．Then，theGST-Rs—AFP2 proteinwassolubilized，denatured，refolded，andpurified．TheresultsofantifungalassayinvitroshowedthattheRs— AFP2proteinexertedobviousinhibitionagainstthegrowthofphyt0pathogenicfungi，suchasRhizoctoniasolani，R． cerealis，Bipolarissorokiniana，Verticilliullldahliae，andFusarium graminearum．Therefore，Rs一／|FP2genemaybe usefulforimproving thecrop resistanceagainsttheabovepathogenicfungi． Keywords：Antifungalprotein Rs—AFP2；Refolding；Antifungalactivity；Phytopathogenicfungus 真菌病害是植物病害中最严重 的一类 ，