3.24特异性小干扰RNA对HT-29大肠癌细胞VEGF基因表达抑制作用.pdf

特异性小干扰RNA对HT一29大肠癌细胞 VEGF基因表达的抑制作用 摘 要 目的研究特异性小干扰RNA(siRNA)对体外培养的肿瘤细胞血管生成的关键 性基因的抑制作用，并对RNA干扰技术在肿瘤治疗领域中应用的可能性进行初步探 讨。 方法 1． 体外转录siRNA：选择血管内皮生长因子fVEOF)基因为靶基因，设计针 siRNA 2． 将siRNA转染入靶细胞：以HT-29人大肠癌细胞系为靶细胞，使用脂质 体转染的方法，将siRNA导入细胞。 3． 观察转染后癌细胞的变化：MTT法检测细胞存活率，RT-PCR检测转染 果。 结果 1． 细胞后均能有效抑制肿瘤细胞的生长，而作为阴性对照组的错义序列 siRNA完全不起作用。 转染后24小时用MTT法检测各组HT一29细胞代谢率的统计结果显示：低、 中、高剂量组的MIT代谢率明显低于正常对照组，与错义对照组(即 率也低于错义对照组，其与错义对照组比较有统计学意义(P0。05)。错 义序列组、脂质体组与正常对照组比较没有显著差异(PO．05)o 3． 表达量明显下降。 4． 细胞组等其它3组，siRNAl和siRNA2组与错义对照组比较有统计学意义。 结论 】． 应用生物软件所设计出来的针对两个靶位点的siRNA均能有效抑制 VEGF蛋白的表达和HT-29细胞的增殖。 ．I一 在大肠癌的抗皿管生成基因治疗中VEGF是有效的靶位点。 RNAi能够成功应用于体外培养的大肠癌细胞系作为基因治疗肿瘤的临 床前试骑，有可能成为未来肿瘤基因治疗的生物类新必药物。 硕士研究生：王宏伟(分子生物学 指导教师：葛银林教授 关键词：RNA干扰；基因治疗；HT一29；VEGF jnHT·2,9ColonCa]_cinO]llaC*ILs the ofVEGF Do,nnregulatingExpression Small RNAs bySpecificInterfering ABSTRACT Objec“ve To the inhibitienofthe of inthe investigatespecific expressionkeygeee ofhumancarcinomaeclllineculturedinvlhowithRNAi and angiogenesis technology TrovethepossibilityofRNAiiacancertherapy． Metitods snlall RNAwasintroducedwithVEGFmlLNAnsn in Specificmteffefing tⅢget culturedhumancolon eeli HT．29．Twe andoneserambledsiRNA carcinomaline siRNAs fora oilline．TilethreekindsofsiRNAswere (used negativecontr