新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF086蛋白的原核表达、纯化及抗体制备.pdfVIP

第 19卷第 1期 上 海 海 洋 大 学 学 报 V01．19．No．1 2010年 1月 JOURNALOFSHANGHAIOCEANUNIVERSITY Jan．，2010 文章编号：1674—5566(2010)01—0001—06 新加坡石斑鱼虹彩病毒 ORF086蛋 白的 原核表达、纯化及抗体制备 夏立群 ，张红莲 ，梁海鹰 ，刘森林 (1．广东海洋大学水产学院，广东 湛江 524025； 2．中山大学生命科学学院，广东 广州 510275； 3．广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室 ，广东 湛江 524088) 摘 要：新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singaporegrouperiridovirus，SGIV)是导致石斑鱼养殖严重经济损失的主要病 原体。本研究构建了含有新加坡石斑鱼虹彩病毒 (Singaporegrouperifidovims，SGIV)ORF086基因的重组表达 质粒载体pET32a—ORF086，将其转化到大肠杆菌中进行融合表达，经SDS—PAGE分析和Westernblot鉴定 ，证 实重组大肠杆菌融合表达 了SGIV ORF086蛋 白。经异丙基一B-D一硫代半乳糖苷 (isoprophl—thio—p—D— galactopyranoside，IVFG)浓度、诱导温度 、诱导时间等诱导表达条件的优化，确定在0．7mmolfLIPTG、16℃诱 导 14h时可溶性 SGIVORF086重组蛋白占重组蛋白的60％。经镍琼脂糖凝胶柱纯化重组蛋白，纯化度达 95％以上。用纯化的SGIVORF086蛋 白免疫小鼠，获得了高效特异的SGIVORF086抗血清。 关键词：新加坡石斑鱼虹彩病毒；原核表达；多克隆抗体 ；SGIVORF086重组蛋 白 中图分类号：Q786；S917 文献标识码 ：A Prokaryoticexpression，purification and antibody preparation ofSGIV ORF086protein XIA Li．qun。 ZHANG Hong．1ian，LIANG Hai．ying。 LIU Sen．1in ， ， (1．CollegeofOcean＆Technology，GuangdongOceanUniversity，Zhanjiang 524025，China； 2．SchoolofZ Science，SunYat—senUniversity，Guangzhou 510275，China； 3．GuangdongProvincialKeyLaboratoryofPathogenicBiologyandEpidemiology _厂orAquatwEconomicAnimals，Zhanjiang 524088，China) Abstract：Singaporegrouperiridovirus(SGIV)isamajorpathogenresultinginheavyeconomiclossesto grouperaquaculture． In this study，recombinantexpression vectorpET32a—ORF086 inserted with SGIV ORF086geneistransformedintoE．coliBL21(DE3)．SDS—PAGEandWesternblotanalysisconfirmthat thetransfomr ed E． coliBL21can expressSGIV ORF086 recom