脐血内皮细胞对脐血CD34-%27%2b-细胞体外扩增及其归巢能力的影响.pdfVIP

摘要 第一部分脐血内皮细胞对脐血CD34+细胞的扩增作用 目的：观察脐血内皮细胞联合细胞因子对脐血CD34+细胞的扩 增作用，比较脐血内皮细胞联合细胞因子接触培养和非接触培养对 脐血CD34+细胞的扩增作用。 方法： 1．脐血内皮细胞(CBEC)的培养及纯化 分离脐血单个核细胞(MNC)，将其加入内皮细胞选择性培养体 抗原，利用ABC免疫组化试剂盒检测内皮细胞纯度。荧光显微镜下 摄取情况。 ． 2．免疫磁珠法分选脐血CD34+细胞 析分选后CD34+细胞的纯度。 3．脐血内皮细胞对脐血CD34+细胞的扩增作用 再直接加在贴壁的亚融合脐血内皮细胞上，接触内皮细胞培养；(4) 室内，最后把Millicell放在亚融合脐血内皮细胞上，从而使内皮细胞 和CD34细胞隔离非接触内皮细胞培养。培养7天后，收集各组非贴 壁细胞，统计有核细胞数及有核细胞数中CD34+细胞数，半固体集 含量。 结果： 经ABC免疫组化试剂盒检测，脐血内皮细胞vWF抗原、CD31 抗原、UEA抗原表达均呈强阳性，CDl44抗原表达呈阳性。流式细 前(Contr01)的细胞总数，CD34．细胞数，集落生成数为对照，计算扩 增7天后CKs组、Con组和Non组的有核细胞数，CD34+细胞数， 8．67士2．2，20．2士6．1，3．32士1．8，10．31士1．2，7．6士2．9。 结论： 1．建立了诱导脐血单个核细胞为内皮细胞的培养体系，诱导培 养14天后，免疫组织化学显示内皮细胞vWF抗原、CD31抗原、 UEA抗原表达均呈强阳性，CDl44抗原表达呈阳性；免疫荧 光显示内皮细胞具有吞噬功能。 2．脐血内皮细胞联合细胞因子接触培养和非接触培养均可以 扩增早期造血细胞，但接触培养组对早期造血细胞的扩增作 用显著优于非接触组。 Ⅱ 第二部分脐血内皮细胞对脐血造血细胞 归巢能力的影晌 达水平以及CXCR4+、CDl1a+和CD49d+细胞扩增倍数；比较扩增 前后造血细胞自然黏附率和迁移率。 方法： 1．实验分组同第一部分。流式细胞仪检测扩增前后造血细胞 1，比较各组CXCR4+、CDlld和CD49d+细胞扩增倍数。 2．黏附实验 MTT比色法测定扩增前后各组细胞与纤维连接蛋白(踟及 小鼠骨髓内皮细胞株(mBMEC)孵育后黏附细胞的A跏值，从而计算 扩增前后各组细胞与FN及mBMEC自然黏附率。收集自然黏附实 · 验中黏附细胞和未黏附细胞做CFU-GM培养，统计黏附细胞和未黏 附细胞中CFU-GM含量之比，检测黏附细胞CFU．GM形成能力。 3．迁移实验 ． 得出各组相对迁移率。 结果： Cks组、Con组和Non组造血细胞CDl la表达均无明显变化，仍保 细胞数、CDlla+细胞数和CD49d+细胞数都得到了不同程度扩增， 数扩增倍数最大，分别扩增了58．13：1=2．19倍和53．56-士2．63倍。 扩增7天后各组造血细胞与FN自然黏附率显示：Con组 HI 迁移率明显高于C酝组和Control组。 结论： 1．脐血内皮细胞联合细胞因子可以改善细胞因子对造血细胞 CD49d+细胞。 2．脐血内皮细胞联合细胞因子显著增加脐血造血细胞的自然 黏附率、迁移率及黏附细胞CFU-GM形成能力。 关键词CD34+细胞，体外扩增，内皮细胞，细胞黏附分子，CXCR4 ABSTRACT Part Effectsof