人参皂甙Rb1对大鼠局灶性脑缺血脑组织GDNF+mRNA与蛋白表达的影响.pdfVIP

人参皂甙Rbl对大鼠局灶性脑缺血脑组织 GDNFmRNA与蛋白表达的影响 摘 要 目的：已有的研究表明人参皂甙Rbl对缺血性脑损伤具有神经保 护作用，但这种神经保护作用机制尚不清楚，故本实验探讨人参皂甙 Rbl神经保护作用是否通过增加胶质细胞源性神经营养因子(GDNF) 的表达而促进神经组织的修复。方法：Wistar健康成年大鼠250．300克： 雌雄不限，大鼠脑缺血模型成功后随机分为两组：人参皂甙Rbl给药 组【再灌注后立即腹腔注射人参皂甙Rbl(40mg／kg)]与单纯脑缺血再灌 注组。正常组大鼠、假手术组各5只作为对照组。线栓法阻断大鼠大 cerebral 脑中动脉(middleartery,MCA)2小时后，分别再灌注3小时， 12小时，1天，2天，3天，5天制备成各时间组，每组5只。在各时 间点过量麻醉处死动物，经心灌注固定，取出脑组织制成石蜡切片或 在各时间点过量麻醉，断头取脑组织放入培0℃保存，备用。逆转录一 聚合酶链反应(RT．PCR)测定GDNFmRNA水平的变化，免疫组织化 布的特点。结果：正常组与假手术组皮质区广泛的GDNF(+)细胞， 在其它脑区有较多的GDNF(+)～(++)细胞。单纯脑缺血再灌注组： 再灌注三小时，额项皮质缺血周边区广泛GDNF(++)的细胞，纹状 弱阳性细胞。再灌注12小时，额顶皮质缺血周边区有一些GDNF(++) 细胞，纹状体缺血周边区零星散在的GDNF(+)细胞。同侧下丘脑未 缺血周边区，纹状体、下丘脑缺血周边区均未见到GDNF阳性细胞。 再灌注2天，额顶皮质缺血周边区内弥漫分布着大量的GDNF(++) 的细胞。纹状体、下丘脑缺血周边区可见少许GDNF(+)的细胞。再 灌注3天，额顶皮质缺血周边区GDNF阳性细胞数量明显减少；纹状 体缺血周边区有少量GDNF(+)的细胞。再灌注5天，缺m侧纹状体 与下丘脑无GDNF阳性细胞，额顶皮质缺向周边区有散在少量GDNF 弱阳性的细胞。整个再灌滓过程中，GDNF阳性细胞数在3小时升高， 12h与1d降低，2天又升高，随后下降。各时间点GDNF阳性细胞数 同2天组比较，差异具有显著性(P0．01)。在人参皂甙Rbl给药组，与 单纯脑缺血再灌注组同时间点比较，再灌注3小时额项皮质缺血周边 区GDNF的阳性细胞数增多，染色增强。下丘脑偶见数个GDNF弱阳 性的细胞。再灌注12小时额顶皮质、纹状体缺血周边区GDNF的阳性 细胞数继续增多，染色增强，且同侧下丘脑有较多的GDNF弱阳性的 细胞。再灌注1天，GDNF强阳性细胞数增多，主要位于视前区、纹 状体缺血周边区。再灌注2天，额顶皮质缺血周边区GDNF强阳性细 胞数明显增多、染色增强。纹状体、海马、视前区、皮质杏仁核也有 较多的GDNF中等阳性的细胞。再灌注3天，GDNF阳性细胞数增多， 主要位于额顶皮质缺血周边区，但染色无变化。再灌注5天，GDNF 阳性细胞数主要集中于双侧皮质，染色呈强阳性。统计学分析显示， 人参皂甙Rbl给药组，GDNF阳性细胞数在各时间点显著高于单纯脑 度判断，在单纯脑缺血再灌注组，在3小时与2天组GDNFmRNA的． mRNA 表达强于其它各时间点；在人参皂甙Rbl给药组，48小时GDNF 的表达强于其它各时间点。在人参皂甙Rbl给药组和单纯脑缺血再灌 注组相比，从cDNA的亮度上看无明显差异。结论：1．脑缺血再灌注 损伤后GDNFmRNA与蛋白表达在3小时与2天分别有两个高峰。给 脑缺血再灌注组和人参皂甙Rbl给药组，GDNF阳性细胞数主要分布 于额顶皮质缺血周边区，其次为纹状体缺Jfn周边区，缺血侧下丘脑偶 见到数个GDNF阳性细胞。3．根据两组间GDNF免疫组织化学 在同一时间点，同一缺血周边区GDNF阳性细胞数染色增强。对GDNF 阳性细胞数统计分析显示，人参皂甙Rbl给药组各时间点GDNF阳性 细胞数远远高于单纯脑缺血再灌注组同时间点的GDNF阳性细胞数 mRNA表达未增强，而免疫 实验显示，给予人参皂甙Rbl后，GDNF 组化的实验显示，给予人参皂甙Rbl后，GDNF蛋白表达明显增强， 提示Rbl对大鼠脑缺血的神经保护作川与增加GDNF蛋白质翻译密切 相关。至于是否同增加G