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实验十二 脂肪酸的β－氧化 实验目的：了解脂肪酸的β－氧化作用 实验原理： 脂肪酸 乙酰辅酶A。 2乙酰辅酶A 乙酰乙酸。 乙酰乙酸 丙酮 β－羟丁酸 本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下与碘生成碘仿： 2NaOH + I2 NaOI + NaI +H2O CH3COCH3 + 3NaOI CHI3 + CH3COONa +2NaOH 剩余的碘可用标准硫代硫酸钠溶液滴定： NaOI + NaI + 2HCl I2 + 2NaCl + H2O I2 + 2Na2S2O3 Na2S4O6 + 2NaI 根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。 器 材： 5ml微量滴定管 恒温水裕 吸管 剪刀、镊子 50ml锥形瓶 漏斗 试管、试管架 试剂、材料 家兔 0.1％淀粉溶液 20ml 0.9％氯化钠溶液 200ml 0.5当量/升 丁酸溶液 150ml 15％三氯乙酸溶液 200ml 10％氢氧化钠溶液 150ml 10％盐酸溶液 150ml 0.1当量/升 碘溶液 200ml 标准0.02当量/升 硫代硫酸钠溶液 500ml 1/15 mol/升 pH7.6磷酸盐缓冲液 200ml 操作方法 制备肝糜 取样（有对照组） 沉淀蛋白 滤液 酮体的测定（滴定） 计算丙酮含量 思考题 样品中丙酮的含量是多少？ 肝糜制备 取新鲜鸡肝 用0.9％氯化钠溶液洗去血污，并吸去表面水分 取5g肝组织，少量0.9％氯化钠溶液在匀浆器中研磨成细浆 用0.9％氯化钠溶液将细浆稀释至10ml 取样 沉淀蛋白质 酮体的测定 * * 缩 合 β－氧化 脱 羧 还 原 保温1.5小时（430C） 过滤 样品中丙酮的含量= (V1-V2) x C x 1/6 Na2S2O3 V1—滴定对照所消耗的Na2S2O3 的体积 V2—滴定样品所消耗的Na2S2O3 的体积 C—Na2S2O3 的浓度 1/15 mol/l pH7.6的磷酸缓冲液 50ml锥形瓶（目的组） 50ml锥形瓶（对照组） 取3ml 取3ml 加入2ml正丁酸 加入2ml肝组织糜 加入2ml肝组织糜 43度恒温水浴1.5h 目的组 对照组 加入3ml15％三氯乙酸溶液 加入3ml15％三氯乙酸溶液 加入2ml正丁酸 静置15分钟后过滤 目的组 对照组 取滤液2ml 取滤液2ml 加入 加入 50ml锥形瓶（新） 50ml锥形瓶（新） 加入3ml0.1当量/升碘溶液 3ml10％氢氧化钠溶液 摇匀，静置10min 加入3ml10％盐酸 加入3ml0.1当量/升碘溶液 3ml10％氢氧化钠溶液 摇匀，静置10min 加入3ml10％盐酸 用标准硫代硫酸钠滴定，滴至浅黄即加入淀粉溶液作指示剂，滴至蓝色消失 公式