植物叶绿体转化的基因枪法研究进展.pdfVIP

· 6· 生物学教学2010年(第35卷)第1期 植物叶绿体转化的基因枪法研究进展 张彦桃 (内蒙古大学生命科学学院实验教学中心 呼和浩特 010021) 摘 要 叶绿体基因组转化由于具有独特的优越性，逐渐成为植物基因工程研究的热点，而基因枪转化法是 目前较为成熟的叶绿 体基因转化技术。本文简述了基因枪转化的原理、方法及优缺点，并重点阐述了叶绿体转化的优点及实践应用的研究进展。 关键词 植物 基因枪 叶绿体 转化 高等植物叶绿体基因工程是植物基因工程发展的 肪酸脱氢酶基因转化番茄叶绿体基因组，获得的转化 新领 域。1988年 Boynton等… 人 以莱 茵 衣 藻 株和对照植株比较，叶和种子中不饱和脂肪酸程度均 (Chlamydomonasreinharditi)为材料，用基因枪成功进 提高 ，不但提高了番茄的耐寒性，同时也提高了其营养 行了外源基因对叶绿体的转化。其后 Svab等l2j将此 价值。③农杆菌介导法。在核基因转化中被证实是非 项技术成功用于高等植物。目前为止已有多种植物， 常有效的方法，尤其用于单子叶植物时明显优于其他 如烟草、马铃薯、油菜等，实现了叶绿体基因转化。近 转化方法。在叶绿体转化中也有人尝试，但未得到很 年来叶绿体基 因转化技术的进步，更加显示出其巨大 好的转化结果，其有效性还有待于进一步探讨。④其 的应用前景。研究证实它是一个能散状辐射到农艺性 他方法。在原有的核基 因转化技术的基础上，针对 叶 状改良以及用植物生物反应器生产各种药物、疫苗抗 绿体基因组转化的特点，Knoblauch等l6J研究开发了 体、功能食品及工业、环保产品的通用核心技术 3。 一 种 “毫微注射技术 (femtojectiontechnique)”的叶绿 叶绿体转基因技术与传统的核基因转化相 比，有 体基因组转化方法。这种技术由于用特殊的合金做注 以下几个突出的优点：①叶绿体属于母性遗传可以防 射器 ，大大减少了注射器对叶绿体造成的伤害。他们 止外源基因随花粉发生逃逸而污染环境 ，解决了生物 用携带 bla基因的质粒转化蓝细菌(Phormidiumlamin- 学家一直担心的转基因植物安全性问题。②叶绿体基 OSll,llt)，结果转化株对氨苄青霉素有抗性。一种转运肽 因组倍性高，例如一个烟草叶片细胞就有约 100个叶 介导的叶绿体间接转化方法是在构建植物表达载体 绿体颗粒，每个颗粒又有 100多个叶绿体基因组，所以 时。把 目的基因和叶绿体的转运肽编码序列相连，然后 其拷贝数极高，这就造就了外源基因的高表达。③叶 用细胞核转化技术把外源基因导入植物细胞，使 目的 绿体基因转化可以通过 同源重组等手段实现定点整 基因编码的蛋白质有可能在转运肽的引导下输送到叶 合，克服了核基因转化的不可预测性，从而也克服了 绿体颗粒中去 【。这种方法利用已经很成熟 的核基 “基因沉默”现象。④由于大多数叶绿体基 因是以多 因转化方法，克服了叶绿体基因组转化的多拷贝问题， 顺反子为转录单位，产生多顺反子 mRNA来合成蛋 白 也是一种可以进一步探索的叶绿体基因组转化方法。 质，所以由一个启动子引导下的多个外源基因可以同 但 目前比较成熟的叶绿体基因转化方法是基因枪转化 时在叶绿体中表达，可实现多个基因的同时表达。 法。 近年来，各国科学家大量尝试叶绿体基因转化方 1 叶绿体基因枪法转化技术的发展 法方面的工作 ，这些工作借鉴核基因转化，主要有以下 基因枪法由美国康乃尔大学 Sanford提出，又称为 四种：①花粉管导入法。如刘博林等 【J将含有龙葵 at- 粒子轰击技术，原理是在一定 的压力作用下，外源 razine基 因psbA的质粒 pBR322转化大豆 ，获得了抗 DNA被