银杏提取物对重症急性胰腺炎大鼠肝组织NF-kB活化及其肝细胞凋亡作用实验与研究.pdf

中文摘要 佳木额大学硕±研究生论文 中文摘要 堡查握塑塑盟重瘗鱼!篷照膣塞太鼠压组终监二塞堡适丝拯压细 胞遇圭佳恿笪塞验婴窒 研究背景： acute 重症急性胰腺炎(severe 腹症。目前其发病机制仍未被完全阐明。此病临床病情凶险、并发症多、死亡率 高，早期死亡的主要原因是多器官衰竭，肝脏是最早最常受累的胰外器官，肝损害 的程度与胰腺炎的程度成正相关。肝损害的机制非常复杂，是目前临床和科研工作 中的倍受关注的热点闯题。研究表明重症急性胰腺炎合并肝损害的机制主要与炎症 介质、细胞因子、血管活性物质、氧自由基、NF-kB、细胞凋亡、胰酶的作用机制等 有关。 NF-kB作为一种重要的多极性细胞转录因子，能够调控多种与炎症有关的细胞 因子转录，近年来研究证实它在肝脏损伤、再生、凋亡等方面均有重要作用，并提 a、IL-6等因子的表达上调，大量细胞因子和炎性介质可共同参与并介导肝损伤的 发生。其中TNF—a起着核心的作用，TNF—a主要通过细胞毒作用、激活炎性细胞及 损伤微循环导致胰腺及胰外器官损害，TNF-a也有诱导肝细胞凋亡的作用。有通过 研究SAP大鼠模型发现，TN卜amRNA在肝组织中的表达升高，并且其程度与胰腺炎 的严重程度呈正相关，提示TNF～a与SAP时的肝脏损害密切相关，这一过程可能是 SAP并发肝损伤的重要机制。目前较多的研究表明，SAP发生时的肝细胞凋亡可能是 导致肝功能衰竭的重要原因之一。 肝脏是机体的最大腺体，参与体内的消化、代谢、排泄、解毒和免疫等功能， 多种内外源性物质都要经过肝脏进行合成、分解、转化、储存，因此是最大的代谢 器官，一病理情况下与机体内环境相互影响，特别是在重症急性胰腺炎时，多种致伤 因子的联合打击，使肝功能严重受损，甚至危及生命。因此研究肝损伤的机制，对 防治重症急性胰腺炎具有重大的意义。 随着对银杏叶提取物(EGb)研究的深入，发现其含多种化学成分，对防治人类 多种疾病有许多重要的药用价值，药理研究揭示其具有消除自由基、对循环系统的 调整、改善血流动力学、组织保护等作用，但其应用于重症胰腺炎防治作用机制方 ．1． !苎量堡笙塑墅塑兰至兰墨丝墼 面的研究报道不多。因此本实验探讨重症胰腺炎肝损伤的机制及肝细胞凋亡情况， 观察银杏叶提取物注射液对肝损伤时NF-kB活化表达及肝细胞凋亡作用的影响，为 临床上重症急性胰腺炎诊治提供理论和实践依据。 目的： 探讨重症胰腺炎肝损伤时NF—kB活化表达及肝细胞凋亡作用，揭示重症胰腺 炎肝损伤发生的部分机制，观察银杏叶提取物注射液对肝损伤治疗作用。 方法： 配，假手术组每个时间点分配5只大鼠，SAP组及治疗组每组每个时间点分配8只大 鼠。采用2．5％戊巴比妥钠lml／kg腹腔注射麻醉，上腹部纵切口切开进腹腔，在胰腺 尾部被膜下注射5％牛黄胆酸钠制作SAP动物模型。假手术组仅翻动胰腺，不给药 物。治疗组于制模前一天开始经腹腔注射EGb液，每8h一次，剂量15mg／kg。各组在 6h、12h、24h_三个时间点处死大鼠，心脏穿刺采血全自动生化分析仪测定ALT、 AST，放射免疫法测定血清TNF～a。经腹部原切口入腹切取肝胰肠等组织标本并用10 ％溶液固定，石蜡包埋，制作石蜡切片。 ． HE染色光镜下观察肝组织病理变化。采用NF．kB亚基P65单抗试剂盒(免疫组化 法)测定肝组织NF．kB活化情况，观察4—5个高倍(10X40)视野，计数细胞核阳性细 胞数与总细胞数的百分比。原位末端标记法(TUNEL)进行肝细胞凋亡检测，数4—5 个高倍视野(10X40倍)，分别计数凋亡细胞数和总细胞数，A1=凋亡细胞数／总细胞数 X100％。 实验结果剂量资料值用X±S显示，各组均数比较采用完全随机设计资料的方差分 亡分析应用相关分析，P0．05为差异有显著意义。统计软件采用SPSSIO．0。 结果： ．2． HE切片：SO组未见异常；SAP组6小时肝组织轻度肿胀，镜下肝细胞轻度水 肿，】2小时肝组织炎性细胞浸润，24小时细胞点片性、局灶性坏死，间质和汇管区 大