藏红花素对HL-60细胞增殖抑制的影响及机制研究.pdfVIP

摘 要 目的 本研究探讨藏红花素(crocin)对人急性自血病细胞HL一60增殖抑制的影响及 其促凋亡机制。 方法 无菌条件下配制crocin溶液，实验分为A-F六组，crocin终浓度分别为O、 0．625、1．25、2．5、 5．0和10 mg／m1。采用血细胞计数板人工计数法测定HL-60 细胞在不同浓度crocin作用后的生长曲线，利用荧光显微镜观察细胞形态学变化， 用吖啶橙／溴化乙锭(AO／EB)混合染液染色，在荧光显微镜下计数凋亡细胞，计算凋亡 率。m法检测细胞的增殖情况，计算不同浓度crocin作用于HL一60细胞不同时间 crocin作用24、48h后bcl-2，bax基因的表达。 结果 HL-60细胞的增殖，随着药物浓度的升高，作用时间的延长，乩-60细胞数目逐渐减 少，呈现出抑制作用，以10mg／m1浓度作用48h时抑制作用最明显。MTT法结果显 示，crocin作用24h时，随着药物浓度的升高，抑制率逐渐升高，组间比较差异有 显著性(F=2．84，PO．05)，以lO mg／ml浓度时抑制率最高。crocin作用48h时， 随着药物浓度的升高，实验各组细胞抑制率逐渐升高，组问比较差异有显著性 有显著性(t=3．59，PO．05)。 ②荧光显微镜下对细胞观察结果显示，crocin作用24h后，对照组中偶见凋 亡细胞，在O．625-5mg／ml时，随着药物浓度的增加，凋亡细胞数目明显增多，以 5mg／ml浓度凋亡细胞形态最为明显．10mg／ml浓度组，凋亡细胞少见，可见大量坏 死及崩解的细胞。作用48h时，以5mg／ml浓度组凋亡细胞数目明显增多，且随着作 升高，浓度为lOmg／ml时凋亡率反而下降，药物浓度过高表现出坏死作用。 ⑨流式细胞仪检测细胞周期结果显示，crocin作用于HL一60细胞48h后，在 浓度的升高，GO／G1期细胞数比例逐渐升高，以浓度为5mg／m】时GO／G1期细胞数比 组比较差异无统计学意义(P均O．05) 升高，bcl一2基因条带亮度逐渐减弱。灰度扫描比值结果显示：在O—lOmg／ml药物 范围内，组间比较差异有显著性(PO．05)，组内两两比较，A组与B组比较无统计 弱。 逐渐增强。灰度扫描比值结果显示：在O-lOmg／m1药物范围内，组间比较差异有显 浓度升高，bax基因表达逐渐增强，以lOmg／ml表达最强． 结论 l、通过不同浓度crocin作用，甩一60细胞生长明显受抑制，并呈现出剂量时间 lOmg／m1时，HL一60细胞凋亡率并没有升高，反而下降，表现为细胞坏死。 作用最明显。浓度为lOmg／ml时，GO／GI期细胞数比例反而下降，药物浓度过高时， 对HL-60细胞主要表现为细胞毒性作用。 强。 4、Crocin可促进细胞凋亡．抑制细胞的增长，其机制为抑制了Bcl-2基因表 达，促进了Bax基因表达，最终导致了细胞增殖周期被阻滞于GO／GI期。 硕士研究生徐慧娟C)L科学) 指导教师 孙立荣 教授 关键词藏红花素；HL_60细胞；细胞凋亡；Bcl-2；Bax Abstract effectofcrocinonhumanLeukemiaHL一60cellandits Inhibitory Mechanism Objecfive This wasto the ofhumanLeukemiaHL-60cellsinduced Study investigate apoptosis crocinandits mechanisms． by possible Method Crocinsolutionwhichwas understerileconditionsweredividedintosix prep