何首乌饮抗D-半乳糖所致脑衰老机制研究.pdfVIP

中文摘要 何首乌饮抗D．半乳糖所致脑衰老机制的研究 摘 要 人体的衰老表现为各脏腑功能的衰退，尤其脑功能的衰 退。脑为元神之府，主宰全身的精神思维活动，全身各部生 理功能，在脑的作用下保持协调与稳定，全身衰老与脑有重 要的关系。脑衰老是一种全身性疾病，主要病位在脑，肾主 骨生髓，髓通于脑，诸髓者，皆属于脑。我国传统医学认为 补肾中药具有延年益寿、健脑、提高记忆力的作用。补肾中 药何首乌饮由《宣明论方》何首乌丸加昧而成。本研究建立 D．半乳糖所致亚急性衰老大鼠模型，通过Morris水迷宫行 为测试：生物化学方法检测脑组织SOD、MDA含量；放射免 蛋白印记法检、狈lJRb／p53细胞转导通路相关基因和蛋白的表 达，探讨何首乌饮抗脑衰老的机理，为研究脑衰老机理以及 研发临床抗衰老中药提供理论依据和实验数据。 目的：通过Morris水迷宫行为测试；生物化学方法检 细胞转导通路相关基因蛋白Rb、p53 P53、P19、P21蛋白的表达，探讨何首乌饮抗脑衰老的机理。 方法：l建立衰老模型及分组：选用清洁级8周龄SD大 鼠90只，雌雄各半，随机分为正常组、模型组、何首乌饮(高、 中、低)组、何首乌丸组、自然恢复组。除正常组外，其余 中文摘要 性衰老动物模型。然后何首乌饮(高、中、低)剂量、何首 乌丸每天空腹灌胃，按体重每100克给0．4毫升计算灌药量， 自然恢复组灌胃等量的生理盐水，连续60d。 2 水迷宫为直径120cm，高50cm的圆形水池， 水深30em， 水温保持(26士1)℃，水面高于平台2cm。在池壁上标4个 入水点，它们将水池等分为l、2、3、4四个象限，在其中1 象限正中处放一个直径为10em，高25em的圆形平台。定 位航行试验用于测试大鼠空间学习和记忆能力。在连续训练 5d，每天训练4次，每次随机选择一个象限作为入水点，观 察并记录大鼠爬上平台的轨迹图、游泳速度及所需时间(潜伏 期)。如果大鼠在60s内未找到平台，需将其引导至平台并 在平台上站208，此时潜伏期记为60s。每只大鼠的训练间隔 为1h。空间探索试验考察大鼠对原平台的记忆能力。训练 第6天上午撤除平台，将大鼠随机从某一象限池壁中点面向 池壁放入水中，记录60s穿越平台部位的次数。 3标本处理：大鼠用10％的水合氯醛麻醉，断头取出脑组织， 迅速投入到液氮中待用。 4用生物化学方法检测大脑皮质SOD、MDA的含量(按说 明书操作)。 明书操作)。 6 mRNA的表达 RT．PCR检测脑组织p53、Rb 6．1抽提总RNA：在液氮中将脑皮质组织碾磨成粉末，按 性琼脂糖凝胶电泳证实所提RNA没有明显降解后， 2 中文摘要 SuperscriptII逆转录酶作用下进行逆转录反应。 6．2cDNA合成：取2嵋总RNA为模板逆转录成eDNA。 6．3 扩增。PCR产物经1．5％琼脂糖凝胶电泳观察结果、照相， 用凝胶图像分析系统分析结果，分别计算各实验组脑组织条 带的光密度与相对的13-actin条带光密度的比值。 7Western 结果：1Moms水迷宫行为测试 1．1各组小鼠潜伏期成绩比较：前2d各组的成绩无显著性 差异，随学习时间的延长各组潜伏期均逐渐缩短，连续5d 的定位航行实验发现，模型组、自然恢复组的潜伏期成绩与 正常组比较明显延长，表明模型建立成功，模型组、自然恢 复组的潜伏期成绩无差别(P0．05)。何首乌饮和何首乌丸 组第3天后的潜伏期与模型组比较均有显著性差异(P 0．01)。其中何首乌饮高剂量组明显好于其余各组(P0．05)。 1．2各组小鼠空间搜索实验结果：正常组穿越平台的次数明 显高于模型组、自然恢复组(PaDJ)；模型组与自然恢复 组穿越平台的次数无明显差别(PD．D5)；何首乌饮和何首 乌丸组穿越平台的次数与模型组比较显著增多(P0．0／)。 其中何首乌饮高剂量组次数明显多于其余各组(P0．003 2测定大脑皮质SOD、MDA含量 模型组、自然恢复组的大脑皮质SOD含量明显降低， MDA含量明显升高，与正常组比较有显著性差异(P0．00， 模型组、自然恢复组的潜