幽门螺杆菌对胃癌培养细胞A4GnT基因表达的诱导作用及调控位点与研究.pdf

中文摘要 幽门螺杆菌对胃癌培养细胞A4GnT基因 表达的诱导作用及调控位点研究 摘 要 幽门螺杆菌(胁眈D6口c幼∥7D以，印)与胃炎、胃溃疡和胃癌的发生 有密切的联系，虽然幽门螺杆菌的感染率可达到50％以上，但大多数感染 寻辛并末卜H现临床症状，因此推测人体自身可产生对幽门螺杆菌的天然防御 能力。有研究表明，在胃黏膜的贲门腺、幽门腺、颈黏液腺、十二指肠 糖胺到具有核2分支O．聚糖的p半乳糖残基上形成Q．1，4_N．乙酰葡糖胺末 端。而在胃腺黏液中，在末端连接有0【．1，4．N．乙酰葡糖胺的O．聚糖黏蛋白 具有天然抗菌素的功能，该物质可抑制幽门螺杆菌细胞壁中的一种成分O【． 葡糖胆固醇的生物合成，从而抑制幽门螺杆菌的增殖、游动并使之变形。 所以推测胃腺黏液细胞中的A4GnT通过在胃腺黏液蛋白的O．聚糖上形成 了0【．1，4-N．乙酰葡糖胺，来阻隔幽门螺杆菌侵入深层胃黏膜，从而起到对 胃黏膜的天然保护作用。因此，我们将幽门螺杆菌与胃癌培养细胞共培养 的改变进行了研究，并且通过电泳迁移率改变分析对可能存在的调控位点 进行了探讨。 基因在砌ⅢA水平的变化；使用免疫组织化学染色的方法研究A4GnT基 因蛋白表达水平的变化；并应用电泳迁移率改变分析探讨与幽门螺杆菌调 控相关的A4GnT顺式作用元件与转录因子的结合，从而研究幽门螺杆菌 诱导A4GnT基因表达改变的调控机制。 方法： 100 浓度，37℃恒温和饱和湿度的培养箱中进行培养，用胰酶消化后以2×105 个／ml细胞数传代，培养24h后用于实验。 中文摘要 2细菌培养：将幽门螺杆菌标准菌株J99和SSl复苏后，接种于含有 B的哥伦比亚琼脂培养基，培养于37℃微需氧条件下3～5d后用于实验。 3实验分组：幽门螺杆菌组：将浓度为1×106 CFU触l的幽门螺杆菌 标准株J99和SSl分别与MKN45细胞共培养6 h后更换培养基继续培养 至24h和48 h h。对照组：细胞内加入等量无幽门螺杆菌的培养基培养6 h。 后更换培养基继续培养至24h和48 4 砌埘A逆转录表达水平，通过1．5％琼脂糖凝胶进行电泳后，与内参照物 p．actin进行比较，判断结果。 548h后免疫组织化学染色法检测各组A4GnT蛋白表达水平，使用 DAB进行显色后，每张盖玻片计数5000个细胞，计算阳性率后判断结果。 624 表达水平，曝光于X光片上，判断结果。 1 7柃测结果的统计分析应用SPSS 7．0统计软件。ImPCR检测结果 应用凝胶一蛋白分析系统进行相对定量分析，以均数±标准差(z士s)表示， 两组间比较用f检验；免疫组化染色结果以各组细胞阳性率表示，两组间 比较用，检验。显著性检验水准为Po．05。 结果： 1 A4GnT (O．1241士0．0084)比较明显升高护O．05)。 2免疫组织化学染色结果：免疫组化染色后，光镜下幽门螺杆菌J99 有明显的增加，两组间的差异有统计学意义(尸O．05)；幽门螺杆菌SSl 有明显的增加，两组间的差异有统计学意义pO．05)。 3EMSA检测与A4GnT顺势作用元件相结合的核转录因子表达结果： 中文摘要 结合位点(一140bp～·1 点结合量明显升高。 结论： 1幽门螺杆菌J99和SSl与胃癌细胞MKN45共培养后，A4GnT基 因mRNA表达量升高。 2幽门螺杆菌J99和SSl与胃癌细胞MKN45共培养后，A4G11T基 因表达的蛋白量升高。