幽门螺杆菌及TNF-α对胃癌培养细胞α4GnT基因表达的调控研究.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………………“1 英文摘要…………………………………………………………………………………4 研究论文 幽门螺杆菌及TNF．a对胃癌培养细胞tz4GnT基因表达 的调控的研究 前言………………………………………………………………………………………“7刖舌………………………………………………一………………………………“……。7 材料与方法………………………………………………………………·8 结果………………………………………………………………………………………··18 Iil：于图………………………………………………………………………………………··20 附表………………………………………………………………………………………··24 讨论………………………………………………………………………………………··26 结论………………………………………………………………………………………“29 参考文献…………………………………………………………………………29 综述幽门螺杆菌对胃粘膜基因谱表达调控的研究…………………………32 致谢…………………………………………·………………··………………····…·…………·46 个人简历…………………………………………………………………………………47 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Up)是一种革兰氏阴性微需氧菌， 感染率约50％以上。幽门螺杆菌与胃炎、胃溃疡和胃癌的发生密切相关， 通过诱导宿主的炎症性因子、转录调节因子、细胞凋亡相关因子、信号转 导因子等多种基因的表达而致病。1994年世界卫生组织将其归为I类致 necrosis 癌原。肿瘤坏死因子(Tumor 症性细胞因子之一，其表达增加与幽门螺杆菌感染存在密切关系，并且促 进了胃炎的发展。 虽然幽门螺杆菌的感染率很高，但多数感染者并无临床症状，因此推 测人体对幽门螺杆菌有自然防御能力。近年来的研究表明，在胃粘膜的贲 门腺、幽门腺、颈粘液细胞等部位存在11．1，4-N．乙酰葡糖胺转移酶 转移N．乙酰葡糖胺到具有核2分支O．聚糖的p半乳糖残基上形成a．1，4．N． 乙酰葡糖胺末端。 研究发现，胃腺粘液中末端连接有甜l，4-N一乙酰葡糖 胺的O．聚糖粘蛋白具有天然抗菌素的功能。它通过影响幽门螺杆菌的细 胞壁成分胆固醇．a．D．吡喃葡糖苷的生物合成来抑制幽门螺杆菌的增殖、 游动并使之变形。推测胃腺粘液细胞中的a4GnT通过在胃腺粘液蛋白的 O．聚糖上生成a．1，4-N．乙酰葡糖胺，来阻隔幽门螺杆菌侵入深层胃粘膜， 从而对胃粘膜具有自然保护作用。因此，我们应用胃癌培养细胞从基因转 录水平和蛋白水平探明幽门螺杆菌及TNF．a对a4GnT基因的调控作用。 探讨幽门螺杆菌与细胞因子TNF．仅对a4GnT基因表达的诱导作用。 ％C02饱和湿度的培养箱内培养，传代后以每毫升3×105个细胞数接种于 新的培养瓶，将接种后48h的细胞用于实验。2．细菌培养：幽门螺杆菌标 中文摘要 万古霉素、1 组a4GnT基因的mRNA表达水平，扩增片段进行8％琼脂糖凝胶电泳， Blot检测各组a4GnT 电泳结果与内参照物GAPDH比较判断。5．Western 蛋白表达水平，近红外双色激光成像系统扫描后，与内参照物GAPDH进 行比较、判断结果。6．免疫组织化学染色方法检测各组a4GnT蛋白表达 水平，DAB显色后，光镜下观察细胞，每张盖玻片计数5000个细胞，计 Blot检测 算阳性率，各处理组与对照组进行比较。7．RT-PCR与Western 结果应用凝胶一蛋白分析系统进行相对定量分析，以均数±标准差(x-l-s) 表示，应用SPSSl7．0统计软件分析，两组间比较用t检验。免疫组化结果 以各组细胞阳性率表示，应用SPSSl7．0统计软件分析，两组间比较用矿 检验。显著性检验水准为PO．05。