VEGF基因真核表达载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达.pdfVIP

重庆医学 2010年 1月第 39卷第 1期 · 论 著 · VEGF基因真核表达载体的构建及其在骨髓 间充质干细胞 中的表达 张从纪，杨彦春 ，单佑安 (第三军医大学西南医院口腔科 ，重庆 400038) 摘 要 ：目的 探讨经腺病毒表达我体转染血管内皮细胞生长 因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)165基 因的骨 髓 间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)体 内外基 因表达的特点。方法 构建VEGF基因腺病毒表达栽体，将 VEGF165 基 因转染到MSCs中。用 RT—PCR法检测转基 因MSCs中基 因表达情况。结果 转基 因 MSCs及其分化 的子代细胞均有 VEGF165的表达 ，并持续 2周左右时间。结论 经腺病毒表达载体转染 VEGF165基 因的MSCs在体 内外均有 良好 的基 因表达。 关键词 ：血管内皮细胞生长因子 ；骨髓 间充质干细胞 ；基因转移 中图分类号 ：R365．641 文献标识码：A 文章编号 ：167卜8348(2010)010004—03 Construction ofvascularendothelialgrowth factorgeneeukaryoticexpression vectoranditsexpression inmesenchymalstem cells ZHANGCong—ji，YANG Yan—chun，SHAN You—an (DepartmentoJStomatolog3，Southzves!Hospital，ThirdM ilitaryMedicalUniversit3，Chongqing400038，China) Abstract：Objective Todetectthegeneexpressionofratmesenchymalstemcells(MSCs)transfectedwithvascularendothelial growthfactor(VEGF)l65mediatedbypAdTrack．M ethods ConstructionofVEGFgeneeukaryoticexpressionvector，andVEGF genewastransferredtOMSCs．GeneexpressionoftransfectedcellswasdetectedbyRT—PCR．Results VEGF transfectedMSCs couldcontinuouslyexpressgeneproductsduringthefirst2weeks．Conclusion MSCstransfectedwithVEGF genebypAdTrack canexpressgeneproductsefficiently invitroandinvivo． Keywords：vascularendothelialgrowthfactor；mesenchymalstem cells；genetransfection 骨髓 间充质 干细胞 (mesenchymalstem cells，MSCs)具有 CD44、CD45。 向其他细胞分化的巨大潜能 。多种生物组织工程和创伤修复 1．3 VEGF基 因腺病毒表达载体 的构建 研究结果充分展示 了MSCs作为种子细胞在创伤愈合过程 中 1．3．1 重组转移质粒 pTrack—CMV—VEGF165的构建 根据 的潜在应用前景[1]。血管 内皮生长因子 (vascularendothelial VEGF165序列设计合成上下游 引物 ，VEGF正义链 5-TT growthfactor，VEGF)是主要 的促进创伤愈合的因子l2]，本研 GCTGCTCTACCTCCAC一3，反 义 链 5|_AATGCTTTCTC— 究将VEGFDNA转染到MSCs中，增强其在MSCs中的表达 ， CGCTCTC~3，长度为 487b