细胞工程重点超强整理.docVIP

第一章绪论 一、 细胞工程：在体外对生物的细胞进行生长与分化的调控、遗传重组与改良，使其生产出人类所需要的产品。包括细胞培养、细胞融合、细胞器移植、核质移植、染色体移植、转基因等技术。其产品有：生物的组织、器官、个体；抗体、多肽药物、蛋白质、酶；天然药物、色素、香精等。 生物工程的组成：细胞工程，基因工程，蛋白质工程，酶工程，发酵工程。 植物组织培养的定义：即培养植物组织，在人工培养基上无菌培养整株植物或植物的器官、组织、细胞或原生质体，又称为无菌培养，离体培养。 植物组织培养的类型: 1.植株培养 (Plant Culture)： 在容器（玻璃瓶、透明塑料瓶等）中无菌培养完整的植株。植株来源：由种子无菌萌发而来；通过植物器官、组织、细胞再生而来，时间较短。 2.胚培养 (Embryo culture)：无菌培养植物的成熟胚或未成熟胚，使其形成正常的植株。 3.器官培养 (Organ Culture)：无菌培养植物的根、茎、叶、芽、花、果等器官,使其增殖或形成其它的组织或器官等。 4.组织培养 (Tissue culture)：指无菌培养植物各种组织（分生组织、形成层、木质部、薄壁组织、胚乳等），或由外植体分化形成的愈伤组织（callus）（在受创伤或者离体条件下用激素诱导产生的，具有旺盛分裂能力，但没有组织和器官分化的细胞群），使其增殖或者分化。 5.花药与花粉培养：无菌培养植物的花药（带花粉）或花粉，形成单倍体植株。是有效的育种辅助手段，单倍体植株获得以后，通过染色体加倍，即得到可以稳定遗传的纯合二倍体，缩短植物育种年限。 细胞培养 (Cell culture)：无菌培养植物的单细胞或小细胞团。细胞培养可用于植物克隆，细胞系的诱变和变异体的筛选，生产有用化合物。 7.原生质体培养 (Protoplast culture)：将无细胞壁的原生质体培养成愈伤组织或植株。由于无细胞壁的障碍，原生质体是实现远缘植物间大规模遗传物质重组的良好体系。 二、植物组织培养简史 1838年，Schwann 和Schleiden在细胞学说基础上提出了细胞全能性假说：一个高等生物身上所有的体细胞均来自一个共同的细胞——合子(受精卵）；在适当的条件下，一个体细胞应能像合子一样具有发育成一个完整个体的能力。 1902年，德国植物学家Gottlieb Haberlandt(哈布兰特，植物组织培养之父，植物组织培养研究第一人）在世界上首次开展了植物组织培养研究，他分离和培养了许多植物的叶肉细胞、髓细胞、气孔保卫细胞。 1922年：Knudson成功地进行了兰花种子无菌萌发，促进了兰花育种、种苗生产和栽培，既而兰花产业的发展。 1934年-1935年（器官培养获得成功）：White(怀特)成功地进行了番茄根尖离体培养，继代培养达400余天。培养基使用了含有丰富B族维生素的酵母提取物(yeast extract)， 发现了VtB对植物组织培养的重要性。 1937年： White建立了第一个组织培养的综合培养基，为White培养基(怀特培养基) ； 1957年，Skoog和Miller发现用激动素可以代替腺嘌呤，形成芽的效果可增加3万倍；提出了细胞分裂素/生长素的比例决定着愈伤组织根或芽的形成：高：形成芽；低：形成根；相当：愈伤组织 被称为植物器官分化的激素调控模式，后来在其它植物上的试验证明这一模式具有普遍性。这一调控模式是植物组织的最重要的指导思想。 1952年（第一例无病毒植株）：Morel和Martin人通过培养感染了病毒病的大丽花的分生组织，得到了无病毒植株。 1958年：Reinert和Steward等分别成功地将胡萝卜的单细胞培养成完整的植株，第一次用试验方法证明了细胞全能性假说。 1959年：Morel在进行兰花脱毒培养时发现了兰花可以通过组织培养技术进行快速无性繁殖。 1962年：Murashige 和Skook 发表了著名的植物组织培养基——MS培养基（最常用）。 三、植物组织培养技术的应用 1、植物科学研究的有效手段。可以提供均匀一致的试验材料（细胞、组织、器官、植株）；研究细胞分裂、生长、分化、细胞壁再生等过程与机理；研究基因的功能。 快速繁殖植物的优良品种 挽救和保存植物的优良品种。通过分生组织培养可以重新获得无毒植株（virus-free plant ），并可以通过超低温保存，长期保存无毒植株的种质。 在植物性状改良上的应用，在育种上的重要作用。 A胚培养可克服远源杂交不孕的困难； B花药（花粉）培养可大大缩短育种年限； C原生质体融合技术可克服有性杂交不亲和，创造远源杂种、甚至新的物种， D单细胞培养技术可用于突变体的筛选， E植物转基因技术：植物转基因技术为人们定向、快速改良植物性状、培育新品种提供了方便