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妇中山丈学博士论文 ZIP激酶基因缺失在胃癌中的研究 ZIP激酶基因缺失在胃癌中的研究 专业：病理学与病理生理学 博士生：毕颍 导师：文剑明教授 中山大学附属第一医院病理学教研室 中文摘要 胃癌是一种人类常见的消化道恶性肿瘤，其发病率位居肿瘤第四位。每年全 球有70万人死于胃癌，胃癌是引起肿瘤相关死亡的第二大杀手。我国为胃癌高发 地区，主要分布在西北和沿海地区。目前胃癌的治疗效果不理想，5年生存率小 于20％。主要原因是就诊时已到晚期；胃癌细胞对现有的化疗药物不敏感。因此 深入研究胃癌的病因及发病机制，对胃癌的预防与治疗有着迫切与重要的价值。 越来越多学者认为肿瘤是基因病，必须探明肿瘤发病的分子机制才能从根 本上控制肿瘤的发生和发展。胃癌的发生与发展与其它肿瘤一样，是一个多因素 作用、多基因参与、多阶段发展的疾病；基因组不稳定是其重要特征。基因组不 稳定在染色体水平表现染色体易位、扩增和缺失等；在核酸水平表现为基因的突 变、基因缺失和扩增、微卫星不稳定、表观遗传异常引起的基因沉默。基因组不 稳定引起癌基因激活、抑癌基因失活以及凋亡相关基因失衡等；细胞生长、增殖、 分化和凋亡等过程的失调控。分子生物学和细胞遗传学研究进一步证实胃癌的发 生、演进是多种基因突变累积的结果，其中癌基因激活及抑癌基因失活发挥着关 键作用。 基因扩增(gene 增和过度表达为肿瘤细胞生长提供选择优势，促进了肿瘤的发生与演进。基因缺 lOSS)是抑癌基因失活的重要方式。抑癌基因的缺失丧失了该基因在细 失(gene 胞周期、细胞增殖和细胞稳定维持等多方面的调控功能，从而促进了肿瘤的发生。 胃癌细胞系及胃癌组织中均存在着复杂的染色体改变，主要表现为肿瘤染色体特 异部位的扩增和缺失，导致了癌基因激活及抑癌基因失活。因此染色体高频扩增 区很可能存在癌基因并由于扩增而激活；而频繁出现基因等位缺失的染色体区域 ◇中山大学博十论文 ZIP激酶基因缺欠在胃癌中的研究 可能存在着肿瘤抑癌基因并失活。 所以从筛选和定位染色体特异区域的扩增和 缺失入手，可以寻找、确定与胃癌相关的癌基因以及抑癌基因。 应用CGH技术检测不同发展阶段的肿瘤染色体异常，不但可以了解肿瘤发 生发展的分子基础，而且可为肿瘤的诊断和预后判断提供遗传标志。更为重要的 是以CGH发现的染色体异常区域为基础，可在扩增或丢失的染色体区域中明确 新的与肿瘤相关的癌基因或抑癌基因。我们课题组曾应用CGH技术检测了62 例原发性胃癌染色体拷贝数的改变，结果显示染色体高频扩增的区域是8q、20q、 13q、和3q；高频缺失区域位于19p、17p、lp。进～步的分析发现19p缺失全 部出现在印戒细胞癌中。基于以上的结果本研究应用高分辨、高通量的比较基因 人工细菌染色体克隆(BAC)，以精确地定位胃癌肿瘤染色体异常的部位，挑选 具有明确临床病理意义的染色体异常区域，通过DNA荧光原位杂交(FISH)技术 进行验证。用蛋白印迹技术(westernblot)、组织微点阵(TMA)和免疫组织化 学技术(IHC)检测相关基因的蛋白表达的变化，分析其临床意义。 本文的目的在于筛选、定位与胃癌相关的癌基因的扩增以及抑癌基因的缺 失，结合相关基因的蛋白表达的变化，探讨可能的致癌机制，为阐明胃癌的发生、 发展机制提供研究基础。全文共分为四个部分： 一、比较基因组杂交微点阵(CGH．array)技术检测胃癌分子遗传学 改变 收集30例新鲜胃癌组织，包括癌组织和癌旁正常胃粘膜组织。提取基因组 软件分析Cy3-Cy5的比值，判断染色体拷贝数的改变。结果发现：有28例样 本获得满意结果。胃癌组织中染色体DNA扩增的频发区域依次出现于：16q21 ◇中山人学博士论文 ZIP激酶基因缺火在胃癌中的研究 8例组织学类型为弥散型。该结果与我们以往研究一致，提示19p13．3可能包含 着与胃癌发生有密切联系的抑癌基因。 二、荧光原位杂交(FISH)验证胃癌组织中染色体19p13．3缺失 收集49例胃癌组织的石蜡切片，根据前面的