碘缺乏致甲状腺功能减退损伤仔鼠海马DG区树突发育及其相关机制与研究.pdf

·中文论著摘要· 碘缺乏致甲状腺功能减退损伤仔鼠海马DG区树突发育 及其相关机制研究 目 的 碘是合成甲状腺激素的主要原料，对甲状腺功能正常发挥起重要作用。碘摄 入不足引起的碘缺乏病是一种世界性的地方病。碘缺乏是引起原发性甲状腺功能 减退症的常见原因。孕期和哺乳期碘缺乏致甲状腺功能减退引起子代不可逆性脑 损伤并导致智力障碍。虽然目自订碘缺乏病是可预防的，且已采取措施进行干预， 但碘缺乏仍是全球性公共卫生问题之一，孕期和哺乳期妇女碘缺乏现象仍普遍存 在，其子代也将暴露于甲状腺功能减退状态，而处于脑发育期的婴幼儿对于该状 态更为敏感。我们以i仃工作发现，孕期和哺乳期碘缺乏与大鼠子代海马存活神经 细胞数减少，神经纤维受损。即使成年后甲状腺激素水平恢复正常，但受损神经 元仍然存在。虽然发育期甲状腺功能减退损伤海马可塑性已得到广泛证实，但孕 期和哺乳期碘缺乏如何影响出生后海马新生神经元仍不清楚。为构建神经环路， 新生神经元需通过树突与轴突进行相互间信息传递。可见树突在神经发生中的重 要地位，然而孕期和哺乳期碘缺乏调节海马树突发育的机制还未明确。胞内蛋白 p—catenin在神经元树突生长发育中起重要作用。细胞周期依赖性蚩白激酶 kinase 5(Cyclin—dependent 的亚基p35结合，Cdk5激酶活性的降低能使更大的聚集体出现；反之引起游离的 B．catenin表达增多。孕期和哺乳期碘缺乏致甲状腺功能减退对仔鼠出生后海马新 生神经元树突发育有何影响?据此，我们采用碘缺乏饲料和丙基硫尿嘧啶 乏致甲状腺功能减退对海马新生神经元树突发育的影响，分析B—catenin和 总体表达的变化规律，探讨碘缺乏致甲状腺功能减退引起海马新生神经元树突发 育障碍的相关机制。 1 实验方法 1、实验动物与分组 用健康雌性wistar大鼠(250 g～280g)，选取21只成功受孕大鼠，按体重均 衡原则随机分为3组，每组7只孕鼠，分组及饮食为：碘缺乏组，缺碘饲料+自 来水；PTU组，普通饲料+5PTu+自来水；对照组，普通饲料+自来水。 ppm 自妊娠第6天起，按照上述方式喂养，直至仔鼠出生后第28大(PND28)。于PND 4，每窝按雌雄数量尽可能相等的原则保留9．10只仔鼠。于PND21断乳、分笼饲 养。于PND 14、21和28，每组随机从不同窝中各抽取8只仔鼠，其中5只仔鼠 用于海马组织免疫荧光染色观察；另3只仔鼠剥离海马组织用于蛋白测定。 2、仔鼠血清甲状腺激素和促甲状腺激素测定 分别于PND 14、21和28时，每组分别随机选取8只仔鼠，丌胸采血，取上 清，一700C保存。采用固相化学免疫发光法测定血清中游离甲状腺素、游离三碘甲 状腺原氨酸和促甲状腺激素的含量。 3、海马新生神经元树突发育观察 各组于PND 14、2l和28分别取5只大鼠，采血后，固定大脑，常规石蜡包 埋，行冠状位连续切片(6¨m)，当观察到切片包含完整的海马时，每隔5～6张 连续切片收集1张，制成石蜡切片。每只仔鼠随机选取3张切片，免疫荧光标汜 新生神经元，镜下观察DG区和CAl区新生神经元树突分支导向及长度变化。 4、海马相关蛋白检测分析 各组于PND 14、21和28分别耿3只大鼠，取大脑组织，剥离海马，按其组 织学结构切分为DG区和CAl区。采用Westem B10tting技术分别检测DG区和 CAl区p．catenin、N—cadherin和p35、Cdk5的表达。 5、统计学处理 采用SPSS建立数据库，进行统计分析。结果表示为均数±标准差(Mean士 sD)。p．catenin、 满足方差齐性时，两两比较采用最小显著差值法；不满足方差齐性时，两两比较 采用Du姗ett’sT3法。P0．05时差异有统计学意义，方差齐性检验水准定为0．1。