逆转录定量 PCR 选择性检测环境样品中的活性分枝 杆菌.pdfVIP

第 ３５ 卷第 ２ 期 环　 境　 科　 学　 学　 报 Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．２ ２０１５年２月 　Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｆｅｂ．，２０１５ ＤＯＩ：１０．１３６７１／ｊ．ｈｊｋｘｘｂ．２０１４．０８０９ 景明．２０１５．逆转录定量ＰＣＲ选择性检测环境样品中的活性分枝杆菌［Ｊ］．环境科学学报，３５（２）：４８４⁃４９０ Ｊｉｎｇ Ｍ． ２０１５．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉａｂｌｅＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ． ｉｎ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｓａｍｐｌｅｓｕｓｉｎｇ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ，３５（２）：４８４⁃４９０ 逆转录定量 ＰＣＲ 选择性检测环境样品中的活性分枝 杆菌 景明１，２ １． 苏州环境监测中心，苏州２１５０００ ２． 同济大学环境科学与工程学院，上海２０００９２ 收稿日期：２０１４⁃０４⁃２０　 　 　 修回日期：２０１４⁃０６⁃０６　 　 　 录用日期：２０１４⁃０６⁃２８ 摘要：以分枝杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．）为研究对象，建立了一种逆转录定量ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ，ＲＴ⁃ｑＰＣＲ）方法，选择性 检测环境样品中的活性分枝杆菌．研究结果表明，稳定期（４８～１４４ ｈ）分枝杆菌细胞内ｈｓｐ６５基因的ＲＮＡ转录稳定，单位细胞内ｈｓｐ６５ 的ｃＤＮＡ 含量约为１拷贝，以此作为活性分枝杆菌的定量依据，达到快速确定环境样品中活性分枝杆菌浓度的目的．相比ｑＰＣＲ，ＲＴ⁃ｑＰＣＲ方法能够区分 ３个数量级的非活性分枝杆菌；样品的底物基质对ＲＴ⁃ｑＰＣＲ方法的影响较小；对于实际样品，与ｑＰＣＲ方法相比，ＲＴ⁃ｑＰＣＲ方法检测实际样品 ２ ＝ 中活性分枝杆菌的结果与培养法更接近，线性关系更加显著（Ｒ ０．９３９０）．本研究表明，作为一种新的检测技术，ＲＴ⁃ｑＰＣＲ可以快速、准确地检 测环境样品中的活性分枝杆菌． 关键词：ＲＴ⁃ｑＰＣＲ；分枝杆菌；活性菌；环境样品 文章编号：０２５３⁃２４６８（２０１５）０２⁃４８４⁃０７　 　 　 中图分类号：Ｘ１７　 　 　 文献标识码：Ａ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉａｂｌｅＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ． ｉｎ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｕｓｉｎｇ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ＪＩＮＧ Ｍｉｎｇ１，２ １． Ｓｕｚｈｏｕ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｕｚｈｏｕ ２１５０００ ２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｔｏｎｇｊｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００９２ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ ２０ Ａｐｉｒｌ ２０１４；　 　 　 ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎ ｒｅｖｉｓｅｄ ｆｏｒｍ ６Ｊｕｎｅ２０１４；　 　 　 ａｃｃｅｐｔｅｄ ２８Ｊｕｎｅ２０１４ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ （ＲＴ⁃ｑＰＣＲ） ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｔｏ ｑｕａｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉａｂｌｅ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ． ｉｎ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｓａｍｐｌｅｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｈｓｐ６５ ｇｅｎｅ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ． ｗａｓ ｓｔａｂｌｅ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ ｇｒｏｗ ｐｈａｓｅ （４８～１４４ ｈ），ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｔａｒ