抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定.pdfVIP

0258—7971 云南大学学报(自然科学版)，加嘶。28(1)：88～92 CN53—1045／NlSSN ofYunnan Journal University 抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定。 吕 琦1，张爱玲2，王泽华1，马岚1 (1．云南大学单克隆抗体工程技术中心，云南昆明650091； 2．云南中医学院，云南昆明650032) 摘要：以重氮反应将盐酸克伦特罗与牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白偶联制备免疫原和检测原，通过杂交瘤技 度为19．85 p∥L，14C5抗体为1．65 丁胺醇的交叉反应性为0．26％，特布他林为0．04％，与非诺特罗、肾上腺素、去甲肾上腺素的交叉反应性都小 于0．02％．因此，所制备的抗盐酸克伦特罗的抗体的特异性高，可用于与其相关的免疫检测研究和应用． 关键词：盐酸克伦特罗；单克隆抗体；竞争法ELISA；口一激动剂；残留 中图分类号：Q813．2文献标识码：A 文章编号：0258—7971(2006)01一0088—05 盐酸克伦特罗(clenbuterol 目前已有多种方法用于对克伦特罗以及_B2一 hydrochloride，CL) 是一种_132一肾上腺素受体激动剂，又称盐酸双氯 肾上腺素受体激动剂的残留分析。主要包括酶联免 醇氨、氨哮素、克喘素等，俗称“瘦肉精”，其化学名 称为a一(叔丁氨基)甲基一4一氨基一3，5一二氯 苯甲醇盐酸盐，分子式为C12H18C12N20·HCl，其结 构式如图1，该药曾被广泛用作兽药治疗哮喘和产 痛．若其使用剂量超过治疗剂量的5～10倍则可改 依靠特殊仪器进行分析，因此具有检测过程繁琐、 善猪等畜禽的生长速率、提高瘦肉转化率和减少脂 检测时间长、且需要专业技术人员操作等特点．农 肪的沉积[11，因此，盐酸克伦特罗作为饲料添加剂 业部2001年颁布的强制性行业标准——“饲料中 使用，由此所引起的滥用导致该药物在动物尿液、 肌肉、肝脏中的残留．若含盐酸克伦特罗的肉类经 HPLC2种方法，且前者为仲裁方法．但由于 食用后，可能会引起心悸、心动过速、肌肉震颤等症 ELISA分析法操作简便、检测快捷、灵敏度高、成 状[2]2．因此，对盐酸克伦特罗在畜禽肉制品及其尿本低等特点，使该方法被广泛用于对可疑样品中盐 液和毛发中的残留检测受到广泛的关注和研究． 酸克伦特罗的残留筛选． C1 为获取免疫检测法分析盐酸克伦特罗中所需 O．H CH3 的特异抗体，本研究通过重氮反应，将CL与载体 I。 cHcH2NH一车一cH3’Hcl 蛋白偶联，并采用杂交瘤技术制备了抗盐酸克伦特 CH3 罗的单克隆抗体，并对抗体的特异性进行了分析． el 图1盐酸克伦特罗的分子结构式(Mr=313．7)1材料与方法 of Molecularstructureclenbuterol Fig．1 hydroeh[oride (Mr=313．7) 1．1材料 1．1．1细胞株和实验动物NS一1骨髓瘤细胞 ·收稿日期：2005—09—20 术成果转化基金项目资助． 作者简介：吕琦(1968一 )，女，云南人。实验师，主要从事动物细胞工程、免疫学方面研究和教学工作． 通讯作者：马岚，女，教授，nmmilan(马rip．sina．oom． 万方数据