BMSCs-壳聚糖凝胶复合体移植治疗椎间盘退变的实验研究.pdfVIP

· l78 · ChineseJournalofReparativeandReconstructiveSurgery,February 2009，Vo1．23，No．2 BMSCs．壳聚糖凝胶复合体移植治疗 椎间盘退变的实验研究 刘杰 王建 周跃 【摘 要】 目的 探讨兔 BMSCs一壳聚糖凝胶复合体移植治疗椎问盘髓核缺损退变的效果，为临床应用提供实 验依据。 方法 6只健康 1月龄新西兰 白兔，雌雄不限，体重 1．0～ 1．5kg。取骨髓2mL，分离培养 BMSCs。取第 3 代BMSCs，5-BrdU活细胞示踪剂标记，与壳聚糖凝胶混匀，制备BMSCs一壳聚糖凝胶复合体。将6只动物建立兔椎问 盘髓核缺损退变模型，并随机分为3组 ( 2)：正常对照组仅分离暴露椎间盘，不作任何处理；移植治疗组将 30uL 自体 BMSCs壳聚糖凝胶复合体注射入缺损椎问盘中心；缺损退变组仅注射入0．O1mol／LPBS液30uL。移植后4周处死动物， 取出移植修复的椎问盘，行细胞5-BrdU标记检测、HE、aggrecan番红O染色及ColII免疫组织化学染色；ColII免疫组 织化学染色切片行灰度值测定。 结果 细胞标记检测发现，自体BMSCs移植后继续存活并增殖，形成细胞克隆。正常 对照组及移植组椎问盘 HE染色示椎间盘结构清晰，髓核组织及外周纤维环分界清晰，细胞核及细胞浆染色明显；缺损退 变组示椎问盘结构紊乱，髓核组织和外周纤维化分界不清。aggrecan番红O染色示正常对照组及移植治疗组椎问盘染色 明显，椎间盘结构清晰；缺损退变组椎间盘结构紊乱，髓核组织和外周纤维化分界不清。ColII免疫组织化学染色示正常 对照组以中央髓核组织染色为主，呈黄褐色阳性反应，椎间盘结构清晰；移植治疗组中央髓核组织呈阳性反应，细胞问质 可见明显黄褐色，大体结构仍保持完整；缺损退变组染色较前两组浅，且结构不清。3组ColII免疫组织化学染色切片行 灰度值测定，正常对照组为223．84士3．93，与移植治疗组 (221．034-3．53)比较差异无统计学意义 (尸0．05)，但两组与缺损 退变组 (172．50土3．13)比较，差异均有统计学意义 (尸0．05)。 结论 兔 BMSCs一壳聚糖凝胶复合体可修复椎问盘缺损 退变，为临床应用可注射式组织工程髓核移植治疗椎 问盘退变奠定实验基础。 【关键词】 组织工程髓核 BMSCs 壳聚糖凝胶 椎间盘退变 兔 中图分类号：R679．4 R679．1 文献标志码：A BMSCs-CHITOSAN HYDROGELCOMPLEX TRANSPLANTATloN FORTREATING INTERVERTEBRALDISC DEGENERATION／uUfie,WANGlian，ZHOUYue．Department0fOrth0pedics,XinqiaoHospital,theThirdMilitaryMedical UniversiO／,Chongqing,400037，P．R．China．Correspondingauthor：WANGJian，E—mailtonywjxq@ahoo．tom．cn [Abstract] Objective ToinvestigatethetherapeuticeffectofBMSCs—chitosanhydrogelcomplextransplantation onintervertebraldiscdegenerationandtoprovideexperimentalbasisforitsclinicalapplication． Methods Twomilliliterof bonemarrow from 6healthyone—month—oldNew ZealandrabbitswereselectedtoisolateandcultureBMSCs．Then，BMSCsat passage3werelabeledby5-BrdU andmixedwithchitosanhydrogeltoprepareBMSCs—chitosanhydrogelcomplex．Sixrab