5种方法提取弓形虫速殖子DNA的效果比较.pdf

2O1O。26 (4) 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJournalofZoonoses 333 文章编号 ：1002—2694(2010)04—0333—04 5种方法提取弓形虫速殖子 DNA的效果比较 沈海英 ”，王廷安 ，周永华。，李冬娜 ，申云侠 ，诸葛洪祥 摘 要 ：目的 用 5种 方法提取 弓形虫速殖子基 因组 DNA，比较 其效果 。方法 分别 以试剂盒 法、直接裂解 法、煮沸法、 酚一氯仿法和盐析法提取 1O倍系列稀释 的 弓形虫速殖子 DNA，通过分光光度计、琼脂糖凝胶 电泳和 PCR 比较其效果。结 果 酚一氯仿法提取 的DNA 纯度最高 ，煮沸法、盐析法、直接裂解法和试剂盒法依次 降低 ；琼脂糖凝胶 电泳可检测 出由直接裂 解法 、酚一氯仿法、盐析法提取 1×1O。个速殖子的基 因组 DNA；试剂盒法、直接裂解法、煮沸法、酚～氯仿法 、盐析法提取 的DNA 经 PCR扩增可检测最少速殖子 的数量依次为 1×1O，无 目的条带，1×lO。，1×1O 。1×lO个。结论 酚一氯仿提取 的DNA 纯 度高 ，用 于PCR扩增具有较高 的敏感性 ，但操作相对繁琐 ；煮沸法操 作简单 ，与除酚一氯仿 法外其他 3种方 法相 比具有较 高 的 敏感性 。其它3种方法提取的DNA纯度不高，用于 PCR扩增 的效果不如前面2种 。 关键词 ：弓形虫速 殖子 ；DNA提 取；PCR；电泳 中图分类号 ：R3825 文献标识码 ：A ComparisonoffiveDNA extractionmethodsforToxoplasmagondiitachyzoite SHEN Hai—ying～，WANG Ting-an ，ZHOU Yong-hua。，LiDong-na，SHEN Yuwxia ，ZHUGE Hong-xiang (1．M edicalCollege，Soochow University，Suzhou 2l5123，China； 2．The5 ondA iliated Hospital，Soochow University，SuzhOR215004，China 3．JiangsuInstituteofParasiticDiseases，Wuxi214064，China) ABSTRACT：TheobjectiveofthisworkwastocomparefiveDNA extractionmethodsincludingDNA extractionkit， schizolysis，boilingmethod，phenol—chloroform extractionandsaltfractionationforToxoplasmagondiitachyzoiteandtOevalu～ atetheireffectsonPCR results．TachyzoiteDNA in l0 fold serialdilutionswasextractedby thesefivemethods．Then the DNA quantityandpurityweredetectedbyEppendorfBiophotometerandagarosegelelectrophoresis．ItindicatedthatDNA pu— rityextracted by phenol—chloroform extraction wasthehighest，following by boilingmethod，saltfractionation，schizolysis methodandDNA extractionkitsuccessively．GenomeDNA from 1×10。tachyzoitesextracted byschizolysis，phenol—chloro— form extractionandsaltfractionation could bedetectedbyagarosegele1ectrophoresis．PCR detection resultsforamountof DNA extractedbyextr