rhEPO对局灶性脑缺血再灌注脑损伤保护机制的研究.pdf

周铁柱等 rhEPO对局灶性脑缺血再灌注脑损伤保护机制的研究 第9期 · 】255 · pathophysiologyofmaturity-onsetdiabetesoftheyoung[J]．N Engl [J】．广西医科大学学报，2005；22(4)． Med，2001；345：971-80． [2009-07-27收稿 2009-12．10修回] 12 黄金华 ．PDX一1与糖尿病的研究进展(J3．医学综述，2008；6：893-903． (编辑 贾春4／张 慧) 13 秦胜花．胰岛素受体、胰岛素受体底物2在胰岛B细胞中的作用 rhEPO对局灶性脑缺血再灌注脑损伤保护机制的研究 周铁柱 王 薇 胡晓颖 陈 雪 (中国医科大学第 四医院神经内科，辽宁 沈阳 110032) [摘 要] 目的 观察rhEPO对缺血性卒中脑海马区不同时间点S100B蛋白表达的动态变化，研究rhEPO对局灶性脑缺血再灌注损伤影响的 可能机制。方法 取66只SD大鼠建立局灶性脑缺血再灌注 (t／R)模型，随机分成假手术对照组(n=6)、脑 I／R组(n=30)、rhEPO治疗组 (n=30)， 按再灌注时间分为5个亚组，每个亚组6只(6h组、12h组、1d组、3d组、7d组)，缺血2h后开始再灌注。免疫组化法检测缺血不同时间各组脑海 马缺血中心和周围区SIOOB蛋白，原位末端标记技术检测各组脑海马缺血中心和周围区神经细胞凋亡。结果 脑 I／R损伤组与假手术对照组比较 细胞凋亡数明显增多 (P0．05)，rhEPO治疗组与脑I／R组相比，凋亡细胞数明显减少 (P0．05)；免疫组化检测结果显示，I／R组与假手术对照组相 比，S100B蛋 白表达明显增加(P0．05)，rhEPO治疗组与脑 I／R组相 比，SIOOB蛋 白表达 明显减少 (P0．05)。结论 rhEPO可能通过减少 S100B蛋 白表达、抗凋亡对局灶性脑缺血 L／R产生保护作用 。 [关键词] EPO；脑缺血；再灌注脑损伤；凋亡 [中图分类号] R743．3 [文献标识码】 A [文章编号】 1005-9202(2010}09-1255-02 近来研究发现 ，重组人红细胞生成素 (rhEPO)对脑缺血再 用线。假手术对照组除不插入栓子外其余同实验组，手术中和 灌注损伤 (t／R)具有神经保护作用 ，S100B蛋白是神经胶质 手术后维持动物体温在 37℃左右，缺血2h后，拔出栓子2mm， 细胞分泌的蛋 白质 ，是反映神经细胞损伤的标记物 ，目前国内 使血液再灌注，成功后假手术对照组及缺血组分别腹腔 内注入 外缺少给予rhEPO后脑缺血灌注区S100B蛋 白动态观察的相 0．3ml生理盐水 ，治疗 组腹腔 内注入 rhEPO(4oooU／kg) 关报道。为进一步探讨 rhEPO对缺血性脑损伤产生保护作用 0．3ml(10ooU)，按不同缺血时间断头，取脑组织。该模型成 的机制，本文观察 了大 鼠局灶性脑缺血再灌注后腹腔 内注射 功的标志：右侧 Homer征 ，左侧出现以前肢为重的偏瘫。实验 rhEPO后大鼠海马区SIOOB蛋白表达的影响。 分3组 ：假手术对照组 6只；I／R组及 rhEPO治疗组，每组 3O 只，均为脑缺血2h再灌注6、12h、1、3、7d处死，每个时间点 1 材料与方法 6只。 1．1 材料 健康Wistar大鼠66只，雄性，体重250～280g，中 1．2．2 免疫组化染色检查 各组大 鼠至指定时间点处死后断 国医科大学实验动物中心提供。10％水合氯醛 、SABC试剂盒、 头取脑，取前囟前后 1mm脑组织 ，常规固定、石蜡包埋、每隔 TUNEL凋亡检测试剂盒、DAB显色剂 (武汉博士德 )；rhEPO 100Ixm连续冠状切片 (厚 6p,m)，进行免疫组化染色检测 (沈阳三生制药股份有限公司)；抗 SIOOB抗体、尼龙线直径 S100