不同细菌浓度及离心条件对大肠杆菌透射电镜观察的影响.pdf

重庆医科大学学报2010年第35卷第 3期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2010．Vo1．35No．3) 一 393 一 技术与方法 文章编号：0253—3626(2010)03—0393—03 不同细菌浓度及离心条件对大肠杆菌透射电镜观察的影响 王 红 ，范京川 -，徐 晨 z，曾 庆 37肖 虹 (1．重庆医科大学生命科学研究院；2．重庆医科大学基础医学院干细胞与组织工程研究室；3．重庆医科大学公共卫生学院统计 教研室；4．重庆医科大学公共卫生学院卫生检验教研室 ，重庆 400016) 【摘 要 】目的：探讨不同的光密度(Opticaldensity，OD)值、离心速度及时间对大肠杆菌透射电镜样品制备及超微结构观察的影 响。方法：按照正交试验设计原则，将不同OD 值的大肠杆菌分成9个不同的离心速度和时间组，比较各组制样难度及电镜下 超微形态及纵、横切面比的变化。结果：各种 0D 值和离心条件对大肠杆菌超微结构影响不大，但 OD 值为0．8，离心时间为 15min时，样品中细菌多呈纵切形态而更适宜观察分析。结论：离体培养大肠杆菌透射电镜样品制备及观察的最佳OD 值为 0．8，离心时间为 15min，离心速度为 5000～12000rra／in。 【关键词 】大肠杆菌；图像分析；样品制备 ；超微结构；电镜 【中国图书分类法分类号】R329．2；Q249 【文献标识码 】A 【收稿 日期】2009—12—17 TheinfluenceofdifferentcOncentratiOnandcentrifugalparametersonTEM samplepreparationofEscherichiacoli WANGHong，et (InstituteofLif~Science，ChongqingMedicalUniversity) A【bstract]Objective：ToinvestigatetheinfluencesofdifferentODvalueandcentrifugalparametersontheultrastructureofEscherichia coliinordertofindoutthebestODvalue，speedandtimeofcentrifugation．M ethods：Accordingtoorthogonalexperimentaldesigning principle．theE coliwithdifferentOD6oovaluesaredividedinto9differentgroupsofcentrifugespeedandtime．ThechangesofE．coli morphologyineachgroupatdifferent0D value，centrifugetimeandspeedwerecomparedundertransmissionelectronmicroscope． Results：ThedifferentOD6o0valuesandcentrifugalparametershavelittleinfluenceontheuhrastructureofE coli，butwhenthe0D valueat0．8．centrifugetimeat15rain，thecross—sectionratiowassignificantlyhigherthanothergroupsandwasmoresuitablefor observation．Conclusion：ThebestparametertopreparetheTEM samplesofE．coliisunderthe0D㈣ valueat0．8andcentrifugation timeat8minutesandspeedat5000～12000r／min． K【eywords】Escherichiacoli；Imageanalysis；Samplepreparation；Uhrastructure；Electronmicroscope 随着现代分子生物学技术和微生物学技术的发展，细菌