牛睾丸支持细胞分离、纯化及体外生长行为研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（５）：９６～１００ 牛睾丸支持细胞分离、纯化及体外生长 行为的研究 １，２  １ １，２ 赵云程 　许　琴 　刘　赛 　陈静波 （１新疆畜牧科学院　乌鲁木齐　８３００００　２新疆农业大学动物科学学院　乌鲁木齐　８３００５２） 摘要　了解牛睾丸支持细胞体外培养的生物学特性，试验采用组合酶消化和选择贴壁法，将５月 龄、６月龄牛胎儿及新生牛睾丸支持细胞分离纯化后进行体外培养。试验结果显示，这一阶段牛 睾丸适宜支持细胞分离纯化用；采用０．２５％胰蛋白酶＋０．０２％ＥＤＴＡ二次消化法是一种经济有 效的牛胎儿睾丸支持细胞分离方案；试验发现，牛胎儿睾丸支持细胞体外研究时间应控制在３～ ２０天内，处于对数生长期的牛胎儿睾丸支持细胞，对牛体外受精卵体外发育有明显的促进作用。 关键词　牛　睾丸支持细胞　体外培养　生长行为 中图分类号　Ｑ９５４．４ 　　睾丸支持细胞（ｓｅｒｔｏｌｉｃｅｌｌ，ＳＣ）及结构是Ｅｎｒｉｃａｌ在 （ＩＬ１，ＩＬ６）、生精生长因子（ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ， １８６５年首次描述的，因其在结构上为生精细胞分化提 ＳＧＦ）、神经营养素３（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ３，ＮＴ３）、神经生长因 供支持，为生精过程提供能量及营养，因此称为生精细 子（ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）、纤溶酶原激活等十多种 胞的“保姆细胞”。在复杂动态生精过程中，支持细胞 营养和生长因子。同时，因为生物学特性及分泌因子 扮演重要角色，不但在向生精上皮传递促性腺激素过 的多样性，支持细胞的应用前景逐渐显露。目前支持 程中发挥中枢作用，控制生精细胞的有丝分裂、减数分 细胞研究，已由起初的生精细胞共培养机制研究，延伸 裂及后续分化一系列动态过程，而且具有支持、营养、 至器官移植、免疫豁免、克隆技术、细胞体外毒性研究 吞噬、释放、分泌等多种功能；同时，支持细胞之间形成 等领域。已报道的睾丸支持细胞研究，主要集中在啮 的紧密连结构成血睾屏障，除阻止外来抗原进入睾丸， 齿类动物，本试验以牛为研究对象，研究了牛睾丸支持 引发免疫应答外，还可防止自身抗原（生精细胞）与机 细胞分离、纯化和体外的生物学特性，以期为相关研究 体接触引发的免疫应答［１］；支持细胞精细的协调作用， 提供依据。 保证了精子发生正常有序地进行。近年来，随着对支 １　材料与方法 持细胞研究的深入，其强大的内分泌调节功能引起越 来越多的关注。研究表明支持细胞天然、稳定和高表 １．１　材　料 ［２］ １．１．１　材料来源　４个５月龄牛胎儿睾丸、２个６月龄 达ＦａｓＬ，是产生免疫耐受的功能细胞 ，并能分泌雄 激素结合蛋白（ａｎｄｒｏｇｅｎｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＢＰ）、苗勒氏 牛胎儿睾丸，采自乌鲁木齐天鹰屠宰场，月龄判断标准 管抑制物质（ｍｕｌｌｅｒｉａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ＭＩＳ）、抑制 参照秦鹏春《哺乳动物胚胎学》；１个新生牛睾丸，由新 素 （ｉｎｈｉｂｉｎ）、激活素 （ａｃｔｉｖｉｎ）、转化生长 因子 β 疆乌鲁木齐种牛场一分厂提供。 （ＴＧＦ）、胰岛素样生长因子 １（ＩＧＦ１）、白介素 １和６ １．１．２　试剂及器械　Ｌ谷氨酸盐（Ｓｉｇｍａ）、谷胱甘肽 β （Ｓｉｇｍａ）、卡那霉素（Ｓｉｇｍａ）、胶原酶ＩＶ（ＣＬＳ，Ｓｉｇｍａ）， 胰蛋白酶（Ｓｉｇｍａ），新生牛血清（ＮＢＳ，Ｇｉｂｃｏ），ＤＭＥＭ 收稿日期：２００７０１２３　修回日期：２００７０３０８