细菌β-淀粉酶活力的测定-LFZ.docVIP

β-淀粉酶活性的测定 1. 原理 β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，其反应如下： 淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量来表示酶活力。 1 unit: 在pH4.8，20℃下3 min内生成1 mg麦芽糖时所消耗的酶的量。 计算方法： β-淀粉酶活性度= 2. 仪器设备 紫外分光光度计 恒温水浴锅 电炉 制冰机 离心机 振荡器 容量瓶：50ml×1、100ml×1 具塞刻度试管：15ml×8支 试管：8支 微量移液器 3. 试剂和溶液 3.1 16 mM sodium acetate buffer. pH4.8 at 20℃ 称取醋酸钠68 g溶于水，加醋酸28.6 mL，用去离子水定容至1000 mL，摇匀，即可。 3.2 1% 可溶性淀粉溶液 称取1.0000 g(精确度为0.001 g) 可溶性淀粉，加入80 mL左右醋酸缓冲液(pH4.8)，在电炉上加热溶解，冷却至室温，用缓冲溶液定容至100 mL，过滤(Advantec)，备用。每次实验时现场配制使用。 3.3 DNS试剂(dinitrosalicyl