2-12医学蛋白质结构.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * （五）维系蛋白质空间结构的非共价键 蛋白质一级结构 蛋白质空间结构 共价键 非共价键 二级结构 三级结构 四级结构 肽键 氢键 疏水键 盐键 范德华力 （二硫键） * 共价键 由一条或二条多肽链上的Cys脱氢氧化生成 主要维系结构 一级结构 空间结构 并非所有蛋白质都含有二硫键 作用 加固非共价键维系的蛋白质空间结构 进一步稳定蛋白质构象和生理功能 二硫键（disulfide bond） * 第四节 蛋白质结构与功能的关系 DNA的碱基排列顺序 蛋白质多肽链上的氨基酸排列顺序 蛋白质的空间构象 蛋白质的功能 一级结构是基础，高级结构是关键 * 1、一级结构不同，功能不同 2、一级结构相同，功能相同 3、一级结构中非关键部位氨基酸残基发生 变化，不影响生物活性。 4、一级结构中关键部位氨基酸残基发生变 化，可导致功能变化。 一、蛋白质一级结构与功能的关系 * 一级结构中非关键部位氨基酸残基发生变化，不影响生物活性 举例 人、猪、牛胰岛素 * 一级结构中关键部位氨基酸残基发生变化， 可导致功能变化 称为分子病 举例 镰刀状贫血病 正常人Hb (HbA) β链N端第6个氨基酸为Glu HbS携氧能力下降 缺氧时RBC呈镰刀状 脆性增加，溶血 镰刀状贫血病（HbS） β链N端第6个氨基酸为Val * 正常人Hb(HbA)： β链N端第6个氨基酸为Glu HbS：β链N端第6个氨基酸为Val 导致：HbS携氧能力下降,缺氧时RBC呈镰刀状，脆性增加，溶血 血红蛋白病——镰刀形细胞贫血症 * 特定功能，特定构象 α-螺旋:指甲/毛发中角蛋白 π螺旋:肌腱/皮肤中胶原蛋白 β-片层:蚕丝中丝心蛋白 离子通道 肌红蛋白:三级结构 血红蛋白:四级结构(别构) 二、空间结构和功能的关系 * 概念： 生理性小分子以非共价键与具四级结构的蛋白质的非活性部位结合，改变亚基间的接触与排列（疏松或紧密），引起蛋白质构象变化、功能改变、活性增高或降低。 别构作用（allosteric effect） * α α β β O2 α α α α β β β β HbO2 松弛态 Hb 紧张态 Hb的别构调节 O2 O2 O2 O2 Hb---别构蛋白 O2---别构剂 * 意义： 根据生物体环境的变化，不断调整蛋白质的活性，以便更好地完成其生理功能 * 举例： HbA α2β2+血红素 亚基之一与O2结合 导致亚基间的盐键断裂 构象轻微变化 （紧密T型 松弛R型） 其它亚基与O2结合力 * 构象改变，功能改变 (分子伴侣) 蛋白质构象疾病 一级结构正确，空间构象改变 蛋白质折叠错误 举例 人纹状体脊髓变性病 老年痴呆症 亨丁顿舞蹈病 疯牛病 (朊病毒蛋白，prion protein, PrP) * 第六节 蛋白质的理化性质 大分子胶体颗粒 蛋白质分子直径≥10nm 亲水胶体 电荷层 水化层 应用 透析方法分离蛋白质 蛋白质沉淀 一、大分子亲水胶体性质 * 多价兼性离子 N端：-NH2 C端：-COOH R基团 在不同pH溶液中电离，带不同电荷 等电点 大多数人体蛋白质pI=5.0 在pH7.4环境下成阴离子 应用 电泳方法分离、纯化、定量蛋白质 二、两性电离与等电点 pH 8.6 电泳缓冲液 ? ? 白蛋白 ?1 ?2 ? ? 原点 * 紫外特征性吸收峰 λ=280 nm 应用 蛋白质定性、定量方法 三、紫外吸收特征与蛋白质定量分析 * 1、概念 在物理或化学因素作用下，蛋白质空间结构破坏,一级结构未破坏，理化性质改变（溶解度降低）、生物活性丧失。 四、蛋白质的变性(denaturation) * 变性因素 物理因素： 加热、紫外线、X射线 化学因素： 乙醇、尿素、胍、强酸、强碱、重金属盐 机制 蛋白质空间结构破坏 一级结构未破坏 性质的变化 结晶能力消失 黏度增加 易被蛋白酶水解 水溶性降低 生物活性丧失 2、特点： * 防止蛋白变性 低温保存 防止蛋白制剂/蛋白质药物的变性失活 免疫球蛋白/酶蛋白/疫苗蛋白/蛋白质类激素 使蛋白质变性 使细菌蛋白质变性失活，消毒杀菌 日光、紫外线、高压蒸汽、酒精、红汞 3、实际应用 * 4、蛋白质复性 ---可以复性，但