实验二：鸡蛋卵磷脂的制备与检测（薄层色谱技术）.docVIP

生化分离工程实验 实验二：鸡蛋卵磷脂的制备与检测（薄层色谱技术） 实验申请 实验项目：蛋黄中卵磷脂的提取与TLC检测 实验原料：鲜鸡蛋、纯化卵磷脂 实验试剂： 乙醇-石油醚（3:1）混合试,丙酮（pH8),1mol/L 的碳酸钠溶液， 硅胶，蒸馏水 实验仪器： 旋转蒸发仪、恒温水浴箱、真空泵、布氏漏斗、抽滤瓶、电子天平烘箱、固定厚度涂布器、方形层析缸、玻璃板、研钵。 辅助器材： 毛细管、玻璃棒、滤纸、漏斗、10ml 量筒、50ml 量筒、烧杯，圆底烧瓶等。 参考文献： [1]谭天伟. 生物分离技术.北京：化学工业出版社.，2007.7 [2]蒋本国，王艳颖，李春斌，刘秋.生物化学实验.大连民族学院。2010.7 [3]刘宝全. 生化分离工程实验讲义（内部试用版）.大连民族学院生命科学院.2011.6 实验记录 操作步骤： 操作说明及结果纪录： 1取 10.0g 鸡蛋黄 ↓ 2蛋黄用 30ml 丙酮（pH8）搅拌1h ↓ 3过滤后，滤渣用丙酮洗2-3 次 ↓↘收集滤渣 4用30ml 乙醇-石油醚（3:1）混合试剂搅拌浸提1h ↓↘收集滤液 5抽滤 ↓ 6旋转蒸发（40℃） ↓ 7收集产品，进行检测 TLC 检测 制板 称取 20 g 孔径为 6 nm 的硅胶 60, 用 45mL 1- 1mol·L 的碳酸钠溶液稀释, 置于 研钵中研磨, 调成均匀的糊状物, 用涂布器 将糊状物均匀地铺在玻璃板上, 铺完后于室 温下风干, 使用前在110 ℃烘箱中活化。 ↓ 点样 用毛细管在层析板距下端 2. 5 cm 处点两个 样,自制卵磷脂样品和标准品, 样点的间距 为3 cm。 ↓ 展开 将展开剂置于层析缸中平衡 30m in, 使溶 剂的蒸汽压在层析缸中达到平衡, 然后放入 层析板, 溶液自下而上在层析板上展开, 上 升速度约 6 cm/h 当展开到层析板高度的 3/4 处即可取出, 置室温下干燥。 ↓ 显色 将显色剂均匀地喷雾在层析板上, 可立即看 到有蓝色斑点出现 提取卵磷脂的关键步骤 1.抽滤时滤纸的剪法 选择大小合适的布氏漏斗，放在滤纸上，用铅笔绕着漏斗的外径画圈，在滤纸上对应漏斗 径尖头处的方向画个箭头，以便于放滤纸时好找方向。 用剪刀剪下画好的圈，目测布氏漏斗的厚度，以这个厚度为标准，绕剪好的滤纸再剪一圈。 注意：剪好的滤纸刚好小于内径，能最好地覆盖全部漏斗上的小孔。 使用布氏漏斗时，要在漏斗颈上套一个橡胶圈。作用为：1）能起固定作用，把漏斗和接 收瓶连接好 2）当抽滤完毕后，先轻轻扭动橡胶圈，再拔出漏斗，防止倒流。 抽滤之前，先用氯仿浸湿滤纸。 2.旋转蒸发仪的使用技巧 原理：通过电子控制，使烧瓶在最适合速度下,恒速旋转以增大蒸发面积。通过真空泵 使蒸发烧瓶处于负压状态。蒸发烧瓶在旋转同时置于水浴锅中恒温加热，瓶内溶液在负压下 在旋转烧瓶内进行加热扩散蒸发。 仪器介绍：蒸馏烧瓶是一个带有标准磨口接口的梨形或圆底烧瓶，通过一高度回流蛇 形冷凝管与减压泵相连，回流冷凝管另一开口与带有磨口的接收烧瓶相连，用于接收被蒸发 的有机溶剂。在冷凝管与减压泵之间有活塞，当体系与大气相通时，可以将蒸馏烧瓶，接液 烧瓶取下，转移溶剂，当体系与减压泵相通时，则体系应处于减压状态。使用时，应先减压， 再开动电动机转动蒸馏烧瓶，结束时，应先停机，再通大气，以防蒸馏烧瓶在转动中脱落。 作为蒸馏的热源，常配有相应的恒温水槽。 蒸发前，先组装好仪器，将循环式真空泵、循环水和旋转蒸发器连接好，检查系统是 否好用，待检查无误后，开始蒸发。温度设置为50℃。 a）换水 在进行蒸发之前，要换好干净的水，防止影响蒸发速率。 b）灌水 在槽中加水，没过排水孔和加热器，但不要太多，防止溢出。 c）连接好仪器后，安装收集瓶和放好溶液的蒸馏瓶，都用塞子给固定好。 d）打开旋转蒸发仪和水域区的电源开关。 e）打开抽水泵，关闭活塞，压力开始下降。 f）使用电机按钮，调解蒸馏瓶的高度，注意蒸馏瓶不要碰到水槽。 g）打开旋转开关，开始旋转。 h）蒸发完毕后，先停止转动，再调解升降杆，脱离水面。 i）打开活塞放气，直到与外界大气压接近。 j）取下蒸馏烧瓶，关闭水泵与电源。 补充： 在蒸馏时进行减压蒸馏 原因： i）减压能提高蒸发速度 ii）减压能降低沸点 在加热时要进行旋转(原因：旋转时能增大蒸发面积且加快蒸发速度提高蒸发质量。 蒸发完毕后，要先打开活塞，流通空气，使大气压相等，防止倒流，污染原料。) 3.TLC 薄层色谱法的技巧 a)制版 用切割器将一整块硅胶板切成小块，宽度可随意，根据溶剂瓶颈的大小来 定，高度