实验十三细胞凋亡的检测.pptVIP

* * 细胞生物学实验之 实验十三 细胞凋亡的检测 南开大学生命科学学院 二零零七年六月 实验目的 细胞凋亡的检测—— 了解细胞凋亡的检测方法 加深对细胞凋亡现象及本质的理解 练习从形态学角度评价细胞凋亡 掌握荧光显微镜的使用方法 细胞凋亡的检测—— 实验原理 基本概念： 细胞凋亡(Apoptosis)是指细胞基因调控的一种自主性的自杀现象。或者说在一定的生理或病理条件下，细胞遵循自身的程序，自我结束生命的死亡方式。由于这种死亡方式是由基因调控的死亡过程，因此又称之为程序性细胞死亡(Programmed Cell Death)。 细胞凋亡有别于细胞坏死。 似秋叶的凋零， 告别生命之辉煌； 那难以计数的攻击、诱导， 轻启着道道程序， 逼细胞步步走向生命的末端； 啊，活性氧处处肆虐， 钙波涛惊石裂岸， 线粒体把生命之光一点一点拧淡; 危难中的细胞啊， 你沉稳不乱， DNA片片切割， 化云梯直通天堂； 细胞体分团相聚， 把生命的凝重浓集在小体上； 分别了朝夕相处的伙伴， 再见了快乐美好的时光； 这一切的一切又融入临近的胞体， 腾出的空间再写生命的篇章。 细胞凋亡与细胞坏死的区别 ——————————————————— ——————————————————— ——————————————————— 坏死 凋亡 1.性质 2.诱导因素 强烈刺激，随机发生 较弱刺激，非随机发生 3.生化特点 4.形态变化 6.DNA电泳 5.炎症反应 7.凋亡小体 8.基因调控 被动过程，无新蛋白合成，不耗能 主动过程，有新蛋白合成，耗能 细胞结构全面溶解、破坏、细胞肿胀 胞膜及细胞器相对完整细胞皱缩，核固缩 弥散性降解，电泳呈均一DNA片状 DNA片段化（180-200bp），电泳呈“梯”状条带 溶酶体破裂，局部炎症反应 溶酶体相对完整，局部无炎症反应 有 病理性，非特异性 生理性或病理性，特异性 无 有 无 细胞凋亡的形态特征 （1）凋亡的起始；微绒毛的消失，细胞间接触的消失，与周围的细胞脱离，细胞质中，线拉体大体完整，染色质固缩 （2） 细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面 （3）凋亡小体的形成。核膜核仁破碎，核染色质断裂为大小不等的片段，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞膜所包围 （4）凋亡小体逐渐被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。 细胞凋亡的形态学特征 细胞凋亡与疾病 细胞凋亡不足： 肿瘤，自身免疫病 细胞凋亡过度： 心肌缺血，心力衰竭，神经元 退行性疾病，病毒感染 细胞凋亡检测方法 基于形态学观察的染色法 基于DNA 片断化的检测法 膜联蛋白检测法 Caspase酶分析法 流式细胞仪定量分析法 细胞凋亡的检测—— 实验原理