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实验九、小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 一、目 的 1．学习分光光度计的原理和使用方法。 2．学习测定淀粉酶活力的方法。 3．了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。 二、原 理 种子中贮藏的碳水化合物主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。 2（C6H10O5）n＋H2O-------nC12H22O11 麦芽糖有还原性，能使3,5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基5-硝基水扬酸。后者可用分光光度计法测定。 休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加。 本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。 三、器 材 1．25毫升刻度试管。 2．吸管。 3．乳体。 4．离心机和离心管。 5．分光光度计。 6．恒温水浴。 7、容量瓶50ml 8、电磁炉 四、试 剂 1. 0.1％标准麦芽糖溶液 20毫升：精确称量100毫克麦芽糖，用少量水溶解后，移入100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。 2．pH 6.9，0.02摩尔／L磷酸缓冲液 100毫升 3．l％淀粉溶液 100毫升：1克可溶性淀粉溶于100毫升 0.02摩尔／L磷酸缓冲液，其中含有 0.006摩尔／L氯化钠。 4．l％3,5-二硝基水杨酸试剂: 1g 3,5-二硝基水杨酸溶于20毫升2摩尔／L的氢氧化钠溶液和50毫升水中；再加人30克酒石酸钾钠，定客至100毫升。若溶液混浊，可过滤。 5．l％氯化钠溶液 300毫升 6．海砂 5克 五、操作步骤 1．种子发芽：（如果是绿豆芽，则只需要24就可以） 小麦种子浸泡2.5小时后，放人25℃恒温箱内或在室温下发芽。 2．酶液提取： 取发芽第三天或第四天的幼苗（芽长约1cm）15株，放人乳钵内，加海砂 200毫克，加 1％氯化钠溶液10毫升，用力磨碎。将匀浆倒入离心管中，用5mL1%氯化钠溶液分次将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15～20min，每隔数分钟搅1次，使其充分提取。然后在3500-4000r/min转速下离心7-10min，将上清液倒入量筒中并记录上清液的体积。进行酶活力测定时，将酶提取液稀释10倍（是否可取5ml→50ml稀释？）。 取干燥种子或浸泡2.5小时后的种子15粒作为对照（提取步骤同上）。 3．酶活力测定： （1）取25毫升刻度试管4支。编号。按下表要求加人各试剂（各试剂须25℃预热10分钟）。 将各管混匀，放在25℃，水浴中保温3分钟后，立即向各管中加人1％3,5-二硝基水杨酸溶液2毫升。 （2）取出各试管，放人沸水浴中加热5分钟。冷至室温，加水稀释至25毫升。将各管充分混匀。 （3）用空白管作对照；在500毫微米处测定各管的光吸收值，将读数填人上表。 4．计算 根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，即：A标准／A未知＝C标准／C未知 ：则C（酶液管浓度）＝A酶×C标准／A标准 式中C代表浓度；A为光吸收值。 六、讨论 大凡禾谷类植物都含有淀粉，有淀粉存在就应该有淀粉酶，只是含酶的多少而已，而淀粉酶活力的大小与萌发前后、时间的长短都有关系。在取样上尽量让反应的时间缩短，以减少酶的损失。 七、小结 通过对以上谷物发芽前后酶活力的测定和计算,可以看出谷物均含有酶都能将淀粉水解成单糖，发芽后的谷物酶活力明显比未发芽的高。（尤以小麦发芽后的活力最强，说明在啤酒生产中应该要用发芽的麦芽为主要原料；而其它的物质如谷子、玉米等应为辅料。绿豆淀粉酶含量太低且成本太高，不宜作为生产啤酒的原料。） 琼州学院实验项目卡 生命科学 系 生化 实验室 开设日期____年___月___日 实验项目 小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 面向专业 课程性质 1、必修 2、选修 实验类型 1、还未开设的新实验 2、手段更新的实验 3、已开设过的实验 本实验学时数 4 实验分组概况 所用主要仪器 名 称 型号规格 数量 名 称 型号规格 数量 有刻度的试管 25ml 24 试管及试管架 若干 乳钵 6 容量瓶 各规格 分光光度计 6 电磁炉 1 恒温水浴箱 1 量筒 10ml 6 离心机 2 滴管 若干 所用主要药品 名 称 纯度级别 数量 名 称 纯度级别 数量 麦芽糖 0.1% 10ml*N 淀粉 1% 10ml*N 0