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电子显微镜技术及在病理诊断上的作用 小组成员 高玉梅 于 虹 郭 峰 刘 阳 张 杰 指导教师 吴 岩 教 授 2007级电子显微镜技术硕士研究生课程 电子显微镜技术及在病理诊断上的作用 一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论 （一）概念 电子显微镜技术：也称电子显微技术 或电子显微术 概念 电子显微镜技术 电镜精密仪器 样品制备技术 1、电子显微镜 ：是用电子束成像的显微镜，电子显微镜是一种高精密度的电子光学仪器，它具有较高分辨率本领和放大倍数，是观察和研究物质微观结构的重要工具。 发明背景：它是在发现电子束具有波动性质及利用磁场改变电子束行径，在上述理论的指导下发明出的。 电子显微镜主要分为两种类型：一种是观察样品内部超微结构的透射电子显微镜，另一种是揭示样品表面形貌的扫描电子显微镜。 电子显微镜特征：电镜与光镜的区别 扫描电镜与透射电镜比较：（见下表） 扫描电镜和透射电镜比较 项目 扫描电镜 透射电镜 分辨本领 70～100 ? 2 ? 发大倍数 20～40万倍 100万倍 加速电压 1～50 KV 几十千伏～几百千伏 图像特点 景深长、三维立体结构 景深小、两维平面结构 样品制备 固定-脱水-临界点干燥-喷涂金属 固定-脱水-包埋-超薄切片-重金属染色 样品尺寸 1cm3 50～100nm切片 样品损伤 光斑直径只有几十埃的电子束在 样品上扫描，对样品损伤极小 大约1μm直径电子束打到样品上，造成一定程度损伤 样品成像信号 二次电子、背散射电子 透射电子 发大倍数调节 用衰减器改变扫描线圈电流，进 行放大率调节 调整中间镜电流改变放大率 决定分辨率因素 入射电子束直径决定图像分辨率。 加速电压、透镜缩小率、电源稳定度及像差决定电子束斑直径 加速电压、电源稳定度、像差、样品厚度等影响分辨率 本图片来自中科科仪 本图片来自中科科仪 2、样品制备 透射电镜样品制备的常用方法：包括超薄切片、冷冻复型、负染色等。 扫描电镜样品制备：比透射电镜样品制备简单。除保存样品表面形貌结构外，只要求样品干燥并能导电，而不需包埋和切片。制备方法与透射电镜样品制备方法一样 。 电子显微镜技术及在病理诊断上的作用 一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论 二．诊断病理学概述 病理学是研究疾病病因、发病机制、形态结构、功能、代谢变化的一门基础医学及其与临床医学之间的桥梁学科。 主要包括基础病理学、实验病理学及诊断病理学(以往称外科病理学或临床病理学) 。各级医院病理科所从事的工作主要是诊断病理学。 病理检查内容通常包括活体组织检查、手术切除标本检查、术中冰冻检查、细胞学检查、尸体解剖检查等。 病理检查的手段很多,如:HE 常规检查、特殊染色(组织化学) 、免疫组化、原位分子杂交、聚合酶链反应( PCR) 、电子显微镜检查、病理图像分析、流式细胞仪检查、细胞培养、传真病理学( telepathology) 等。 电子显微镜技术及在病理诊断上的作用 一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论 三．电子显微镜技术在病理诊断上的作用 （一）电镜检查起决定性作用 （二）电镜检查起参考和修正作用 （三）电镜检查起验正作用 三．电子显微镜技术在病理诊断上的作用 （一）电镜检查起决定性作用：电镜发现特异性超微结构信息做出最后病理诊断。 例：男,39 岁,发现右侧颈部无痛肿物1 年余,花生米大,取肿物做活检。光镜:增大的淋巴结,结构紊乱,但仍残留滤泡与淋巴窦,窦腔及淋巴索充以大量胞质丰富的嗜伊红细胞,直径约20 μm。核圆,卵圆或扭曲状。间有增生的淋巴细胞及嗜酸性粒细胞。电镜:大细胞排列疏松、无连接、胞质宽广,见有似网球拍或柄的双膜结构(Birbeck 颗粒) ,证明光镜下嗜伊红大细胞为朗格汉斯细胞(图1) 。诊断为淋巴结朗格汉斯细胞组织细胞增生症。电镜诊断具有独特的确诊价值。 图1　朗格汉斯细胞组织细胞增生症:见双模构成的似网球拍状的Birbeck 颗粒。 EM ×10 000 注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏, 张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值 . 临床与实验病理学杂志;2002 ;15（5） （二）电镜检查起参考和修正作用：电镜获得的信息对光镜结果予以补充或修正,最终做出最后病理诊断。 例：男,因左颌下淋巴结肿大就诊。经淋巴结活检,病理诊断为淋巴组织增生。不