实验六植物根系活力的测定.pptVIP

?一、实验目的 ? 了解测定根系活力的方法及原理，掌握TTC法测定根系活力的方法 ?二、实验原理 ?氯化三苯基四氮唑（TTC）是一种氧化还原色素，水溶液无色，可被根系细胞中的琥珀酸脱氢酶还原，生成红色不溶于水的三苯基甲臜（TTF）。 三、实验器材与试剂 1、实验仪器 烧杯，分光光度计，容量瓶，恒温箱，石英砂，研钵，量筒，三角烧瓶，刻度试管 2、实验试剂 乙酸乙脂，连二亚硫酸钠，1％TTC（准确称取TTC1.00 g，溶于少量水中，定容至100 ml）,1 mol/L硫酸（用量筒取98％浓硫酸55 ml，边搅拌边加入到盛有500 ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000 mL）,0.4 mol/L琥珀酸（称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml），66 mmol/L磷酸缓冲液（pH7.0。A液：称取Na2HPO4﹒2H2O 11.876g溶于蒸馏水中，定容至1000 mL；B液：称取KH2PO4 9.078g溶于蒸馏水中，定容至1000 mL。用时取A液60mL,B液40mL混合即可） 3、实验材料： 植物根系 四、实验步骤 ?1、定性观察 （1）反应液的配制：将1％TTC溶液、0.4 mol/L琥珀酸和66 mmol/L磷酸缓冲液（pH7.0）按1：5：4混合。 （2）将待测根系仔细洗净后小心洗干，浸入盛有翻译液的三角烧瓶中，置于37℃暗处2-3h，观察着色情况，根尖端几毫米及细侧根都明显变红。 ?2、定量测定 （1）TTC还原量的测定：称取根样品1－2g，浸没于盛有0.4％TTc和66 mmol/L磷酸缓冲液（pH7.0）的等两混合液10 mL的烧杯中，于37℃保温3 h，然后加入1mol/L硫酸2 mL终止反应。取出根，小心擦干水分后于3-5mL乙酸乙酯和少量石英砂仪器在研钵中充分研磨，以提取出甲臜，过滤后将红色的提取液移入容量瓶中，最后补充乙酸乙酯至刻度，用分光光度计于485 nm处比色，以空白试验（先加硫酸，再加根样品）作为参比读出OD，查标准曲线，即求出TTC的还原量。 （2）计算：TTC还原强度＝TTC还原量（g）/各民族金瓶梅嘎（g）×时间（h）。 （3）标准曲线的制作：配制浓度0、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.005％的TTC溶液，各取5mL放入刻度试管中，各取5 mL乙酸乙酯和少量Na2S2O4（约2 mg，各管中量要一致），充分振荡后产生红色的甲臜，转移到乙酸乙酯层，待忧色液层分离后，补充5 mL乙酸乙酯，振荡后静置分层，取上层乙酸乙酯液，以空白作为参比，在分光光度计上于485 nm处测定各溶液的OD，然后以TTC浓度作为横坐标，OD作为纵坐标绘制标准曲线。 ? 注意事项： 根系应吸干水分但不能用力挤压伤及细胞，才能测定准确。 五、作业 ? 比较不同生境条件下的植物根系活力。