糖链的序列测定—Smith降解法.docVIP

糖链的序列测定—Smith降解法摘要： Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。 然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。 以葡聚糖为例，其反应式如下图： 以1→2位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放； Smith降解后产生甘油。以14位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；Smith降解后产生赤藓醇。以13位键和的糖基不被高碘酸氧化；Smith降解后仍为原来糖。以16位键和的糖基或非还原末端基（1）经高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同时释放一分子甲酸 ；Smith降解后产生甘油。Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。以葡聚糖为例，其反应式如下图： 以12位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；Smith降解后产生甘油。以14位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；Smith降解后产生赤藓醇。以13位键和的糖基不被高碘酸氧化；Smith降解后仍为原来糖。以16位键和的糖基或非还原末端基（1）经高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同时释放一分子甲酸 Smith降解后产生甘油。本实验通过纸层析检测终产物中的甘油、赤藓醇和糖。 【实验材料】 0.1mol/L醋酸。 2mol/L硫酸。 硼氢化钾。 纸层析试剂及器材：除显色剂外，同实验二。 硝酸银显色剂： A: 16%硝酸银水溶液: 丙酮为1：9（V/V）。 B: 1%NaOH乙醇溶液(W/V)。 C: 6mol/L氢氧化铵。 【实验操作】 1. 还原和水解 高碘酸氧化后经乙二醇处理的溶液对流水透析48小时，蒸馏水透析24小时，于40以下减压浓缩至10ml左右，加入70mg硼氢化钾于室温、暗处搅拌18小时~24小时以还原多糖醛。用0.1 mol／L醋酸中和至pH6~7，对流水透析48小时，蒸馏水透析24小时，减压蒸干，加1 mol／L硫酸2ml，封管，100水解8小时，用碳酸钡粉末中和，定量滤纸过滤，滤液减压浓缩后，通过纸层析方法检测。 2. 纸层析 操作详见实验2（单糖组成分析）。展层后，将滤纸取出，自然干燥，喷上试剂A ，自然干燥，将滤纸浸入试剂B中，待斑点显出后，再浸入试剂C中以洗去滤纸上的氧化银，然后用水冲洗1小时左右，风干。以正丁醇：乙酸：水=4：l：5为展层剂时，甘油的Rf为：0.48，赤藓醇的Rf为：0.35。 3