淀粉酶活性的测定.docVIP

淀粉酶活性的测定 1、实验试剂： （1）1%淀粉磷酸缓冲液 称取1.0g的可溶性淀粉，加热溶于磷酸缓冲液，冷却后定容至100ml （2）磷酸缓冲液（ph6.9） 称取0.712g Na2HPO4.2H2O 和0.07nacl溶于150ml的蒸馏水，用浓正磷酸将ph调制6.9，并用蒸馏水定容至200ml. （3）2mol/l的NaOH溶液 称取8g的 NaOH溶于蒸馏水，100ml容量瓶定容. （4）显色剂 称取1.0g的3,5二硝基水杨酸滴入少许蒸馏水， 20ml的NaOH（2mol/l），溶解后取30.0g的酒石酸钾钠溶于该溶液，然后用蒸馏水定容至100ml (5)麦芽糖溶液 称取180mg一水麦芽糖溶于蒸馏水，定容至100ml. 2、 实验仪器：. 容量瓶： 100ml（5） 200（1） 烧杯 ： 100ml（6）500ml (1) 移液管： 10ml（2） 1ml(3) 试管： 若干 3、实验步骤： (1)不同酶量 标准曲线的制作： 试管号 1 2 3 4 5 6 麦芽糖溶液(ml) 0 0.2 0.4 .0.6 0.8 1 蒸馏水(ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 混匀后38摄氏度准确保存3min 显色剂(ml) 1 1 1 1 1 1 沸水浴5min后冷却 加10ml的蒸馏水后540nm下比色 实验数据及结果： 组数 1 2 3 4 5 6 A 0.054 0.170 0.323 0.483 0.624 0.798 B 0.053 0.166 0.323 0.471 0.636 0.753 不同酶量活性的测定 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 肠液 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 缓冲液 500 490 480 470 460 450 440 430 420 410 400 390 380 370 360 底物 500ul 立即混匀后38度水浴3min 显色剂 1ml 立即混匀后沸水浴中水浴5min冷却 加入10ml的蒸馏水后比色 实验数据及结果 组数 OD值1 OD值2 均值 酶量 带入标曲 1 0.226 0.234 0.23 0 0.205811 2 0.241 0.263 0.252 10 0.221996 3 0.294 0.293 0.2935 20 0.252528 4 0.327 0.318 0.3225 30 0.273863 5 0.359 0.359 0.359 40 0.300716 6 0.372 0.384 0.378 50 0.314695 7 0.413 0.413 0.413 60 0.340444 8 0.463 0.463 0.463 70 0.377229 9 0.485 0.485 0.485 80 0.393415 10 0.495 0.495 0.495 90 0.400772 11 0.548 0.548 0.548 100 0.439764 12 0.585 0.585 0.585 110 0.466985 13 0.629 0.629 0.629 120 0.499355 14 0.688 0.688 0.688 130 0.542762 15 0.726 0.726 0.726 140 0.570718 （2）平行实验（酶量30ul） 试管号 1 2 3 4 5 6 7 肠液 30ul 缓冲液 470ul 底物 500ul 立即混匀后38度水浴3min 显色剂 1 1 1 1 1 1 1 立即混匀后沸水浴中水浴5min冷却 蒸馏水 10ml 540nm下比色 数据及结果： 组数 OD值（540） 酶量 带入标曲 1 0.23 0 0.205811 2 0.318 30 0.270553 3 0.325 30 0.275703 4 0.329 30 0.278645 5 0.317 30 0.269817 6 0.317 30 0.269817 7 0.324 30 0.274967