食品（微生物学检验沙门氏菌）的检验.docVIP

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB 4789.4—2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 National food safety standard Food microbiological examination: Salmonella 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 GB 4789.4—2010 前 言 本标准代替 GB/T 4789.4-2008《食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验》。 本标准与 GB/T 4789.4-2008 相比，主要变化如下： ——修改了标准的中英文名称； ——修改了标准的范围； ——修改了培养基和试剂； ——修改了设备和材料； ——修改了附录 A。 本标准的附录 A、附录 B 为规范性附录。 本标准所代替的历次版本发布情况为： ——GB 4789.4-84、GB 4789.4-1994、GB/T 4789.4-2003、GB/T 4789.4-2008。 I  食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 1 范围 本标准规定了食品中沙门氏菌（Salmonella）的检验方法。 本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。 2.2 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，42 ℃±1 ℃。 2.3 均质器。 2.4 振荡器。 2.5 电子天平：感量 0.1 g。 2.6 无菌锥形瓶:容量 500 mL，250 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 2.8 无菌培养皿：直径 90 mm。 2.9 无菌试管：3 mm×50 mm、10 mm×75 mm。 2.10 无菌毛细管。 2.11 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 2.12 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）： 见附录 A 中 A.1。 3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录 A 中 A.2。 3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录 A 中 A.3。 3.4 亚硫酸铋（BS）琼脂：见附录 A 中 A.4。 3.5 HE 琼脂：见附录 A 中 A.5。 3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：见附录 A 中 A.6。 3.7 沙门氏菌属显色培养基。 3.8 三糖铁（TSI）琼脂：见附录 A 中 A.7。 3.9 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录 A 中 A.8。 3.10 尿素琼脂（pH 7.2）：见附录 A 中 A.9。 3.11 氰化钾 （KCN） 培养基：见附录 A 中 A.10。 3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录 A 中 A.11。 3.13 糖发酵管：见附录 A 中 A.12。 3.14 邻硝基酚 β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基：见附录 A 中 A.13。 3.15 半固体琼脂：见附录 A 中 A.14。 3.16 丙二酸钠培养基：见附录 A 中 A.15。 3.17 沙门氏菌 O 和 H 诊断血清。 3.18 生化鉴定试剂盒。 4 检验程序 沙门氏菌检验程序见图 1。 检样 25 g（mL）样品+225 mLBPW 36 ℃±1 ℃，8 h～18 h 1 mL+TTB 10 mL 1 mL+SC 10 mL 42 ℃±1 ℃，18 h～24 h 36 ℃±1 ℃，18 h～24 h 36 ℃±1 ℃，40 h～48 h 36 ℃±1 ℃，18 h～24 h 挑取可疑菌落 TSI，赖氨酸，NA， 靛基质， 尿素 (pH 7.2)，KCN 生化鉴定试剂盒或全 自动微生物生化鉴定 系统+ H2S+ 靛基质 - 尿素-KCN- 赖氨酸 + H2S+ 靛基质 + 尿素- KCN- 赖氨酸+ H2S- 靛基质- 尿 素-KCN- 赖氨酸+/- 反应结果与左 侧描述不符  甘露醇+、山梨醇+ ONPG- 沙门氏菌，血清学试验 非沙门氏菌 报告 图 1 沙门氏菌检验程序 5 操作步骤 5.1 前增菌 称取 25 g（mL）样品放入盛有 225 mL BPW 的无菌均质杯中，以 8 000 r/min～10 000 r/min 均质 1 min～2 min，或置于盛有 225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。若样 品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定 pH 值，用 1 mol/mL 无菌 NaOH 或 HCl 调 pH 至 6.8±0.2。 无菌操作将样品转至 500 mL 锥形瓶中，如使用均