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高效液相色谱法测定多环芳烃浓度 1、 HPLC与GC的区别 高效液相色谱分析法(HPLC)，它的基本概念及理论基础（如保留值、塔板理论、速率理论、容量因子、分离度等），与气相色谱是一致的，但又有不同之处：高效液相色谱与气相色谱的主要区别可归结于以下几点：(1) 进样方式的不同：高效液相色谱只要将样品制成溶液，而气相色谱需加热气化或裂解；(2) 流动相的不同，在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着一定的相互作用力；(3) 由于液体的粘度较气体大两个数量级，使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中约小4~5个数量级；(4) 由于流动相的化学成分可进行广泛选择，并可配置成二元或多元体系，满足梯度洗脱的需要，因而提高了高效液相色谱的分辨率（柱效能）；(5) 高效液相色谱采用5~10Lm细颗粒固定相，使流体相在色谱柱上渗透性大大缩小，流动阻力增大，必须借助高压泵输送流动相；(6) 高效液相色谱是在液相中进行，对被测组分的检测，通常采用灵敏的湿法光度检测器，例如，紫外光度检测器、示差折光检测器、荧光光度检测器等；(7) 液相色谱与气相色谱相比较，高效液相色谱同样具有高灵敏度、高效能和高速度的特点。高效液相色谱的定性和定量分析，与气相色谱分析相似，在定性分析中，采用保留值定性，或与其他定性能力强的仪器分析法连用；在定量分析中，采用测量峰面积的归一化法、内标法或外标法等，但高效液相色谱在分离复杂组分式样时，有些组分常不能出峰，因此归一化法定量受到限制，而内标法定量则被广泛使用。 2、 梯度洗的原理 梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗脱在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比。流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。 当样品中的一个峰的k值和最后一个峰的k值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。如图两个容器放于同一水平上，两容器连通，B与柱相连，当溶液由B流入柱时，A中的溶液就会自动来补充，经搅拌与第一容器的溶液相混合，这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化。缩短分析周期；提高分离能力；峰型得到改善，很少拖尾；增加灵敏度。但有时引起基线漂移。 3、 常用液相色谱测器 1)、紫外吸收检测器（UVD）是目前HPLC中应用最广泛的检测器。它的主要特点是灵敏度高，线性范围宽，对流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。它要求被检测样品组分有紫外吸收，属于选择性检测器。 二极管阵列检测器（PDAD）是20世纪80年代才出现的一种光学多通道检测器，它可以看作是UVD的一个分支。在对每个洗脱组分进行光谱扫描，经计算机处理后，得到光谱和色谱结合的三维图谱。其中吸收光谱用于定性（确证是否是单一纯物质），色谱用于定量，常用于复杂样品（如生物样品、中草药）的定性定量分析。 荧光检测器（FLD）同样属于选择性检测器，其灵敏度在目前常用的HPLC检测器中是最高的，应用也较多，仅次于UVD。它适用于能激发荧光的化合物。很多与生命科学有关的物质，如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用，尤其在用荧光衍生后，可以检测很微量的氨基酸和肽 其余还有一些通用型的检测器，如示差折光检测器（RID）、蒸发光散射检测器（ELSD）、质谱检测器（MSD）等 化工专业实验 2 图1 梯度洗脱示意图