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第九章 吸光光度法 9.1 吸光光度法的基本原理 9.2 光度计及其基本部件 9.3 显色反应与显色条件的选择 9.4 吸光度测量条件的选择 9.5 吸光光度法的应用 吸光光度法 1、定义：基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。它包括比色法，可见分光光度法及紫外分光光度法。 2、特点： （1）灵敏度高：10-5~10-6，10-7~10-8，10-10 mol·L-1， （2）准确度高：比色分析，相对误差5~10%，分光光度法，2~5%，1~2%； （3）应用广泛：可测定几乎所有无机物和许多有机物； （4）操作简便仪器设备易普及。 比色分析法：比较颜色的深浅来测定物质的浓度的方法。(物质浓度越浓，颜色越深) 分光光度法：应用分光光度计测定物质的吸光程度来测定物质的浓度的方法。 可见光:人眼能感觉到的光。 当一束白光通过某一溶液时，一些波长的光被吸收，另一些波长的光则透过。透过的光(或反射光)刺激人眼而使人感觉到颜色的存在。溶液的颜色由透射光的波长决定。 无色：对光谱中各种色光透过程度相同。 有色：物质的颜色由它透过或反射的光决定。 当一束光照射到某物质或其溶液时，组成该物质的分子、原子或离子与光子发生“碰撞”，光子的能量被分子、原子所吸收，使这些粒子由最低能态（基态）跃迁到较高能态（激发态）： M + hυ → M* → M +热或荧光 被激发的粒子约在10-8S后又回到基态,并以热或荧光等形式释放能量。 这个作用叫物质对光的吸收。 分子、原子或离子具有不连续的量子化能级，仅当照射光光子的能量（hυ）与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差相当时才能发生吸收。 △E = E2 - E1 = hυ= h C/λ 不同的物质微粒由于结构不同而具有不同的量子化能级，其能量差也不相同。所以物质对光的吸收具有选择性。 不同物质吸收光谱的形状以及?max不同 －定性分析的基础 同一物质，浓度不同时，吸收光谱的形状相同，Amax不同 －定量分析的基础 吸光度与光程的关系 A = ?bc A = ?bc 吸光度 A = ?bc A = ?bc 吸光度与浓度的关系 A = ?bc A = ?bc 吸光度与波长的关系A = ?bc 吸光度与波长的关系 A = ?bc 吸光度与波长的关系 A = ?bc 1. 由于非单色光引起的偏离 严格地讲，朗伯-比耳定律只对一定波长的单色光才成立。但在实际工作中，目前用各种方法得到的入射光并非纯的单色光，而是具有一定波长范围的单色光。那么，在这种情况下，吸光度与浓度并不完全成直线关系，因而导致了对朗伯—比耳定律的偏离。 2.由于溶液本身的物理或化学因素引起的偏离 （1） 介质不均匀性引起的偏离 朗伯-比耳定律是建立在均匀、非散射基础上的一般规律、如果介质不均匀，呈胶体、乳浊、悬浮状态存在，则入射光除了被吸收之外、还会有反射、散射作用。在这种情况下，物质的吸光度比实际的吸光度大得多，必然要导致对朗伯-比耳定律的偏离。 （2）化学因素引起的偏离 a. 溶液浓度过高引起的偏离 朗伯-比耳定律是建立在吸光质点之间没有相互作用的前提下。但当溶液浓度较高时，吸光物质的分子或离子间的平均距离减小，从而改变物质对光的吸收能力，即改变物质的摩尔吸收系数。浓度增加，相互作用增强，导致在高浓度范围内摩尔吸收系数不恒定而使吸光度与浓度之间的线性关系被破坏。 b. 化学变化所引起的偏离 溶液中吸光物质常因解离、缔合、形成新的化合物或在光照射下发生互变异构等，从而破坏了平衡浓度与分析浓度之间的正比关系，也就破坏了吸光度A与分析浓度之间的线性关系。产生对朗伯-比耳定律的偏离。 分光光度法的基本部件 分光光度计的主要部件（1） 光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度且不随λ而改变。稳定。 可见光区：钨灯，碘钨灯 紫外区：氢灯，氘灯 单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。 分光元件：滤光片，棱镜，光栅 吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。 可见光区：光学玻璃 紫外区：石英 分光光度计的主要部件（2） 检测器：利用光电效应，将光强度转换成 电流讯号。 光电池，光电管，光电倍增管 检流计（指示器）：将信号以适当方式显示 或记录。 低档仪器：刻度显示 中高档仪器：记录仪，数字显示 分光元件（1） 棱镜：依据不同波长光通过