抑制型电导和脉冲积分安培检测-离子色谱法测定.docVIP

抑制型电导和脉冲积分安培检测-离子色谱法测定 摘要：本文采用IonPac CS18，一种弱酸型阳离子交换柱，与抑制型电导检测、积分脉冲安培检测（IPAD）和紫外检测(UV)联用无需衍生测定肉和奶酪中的生物胺。CS18柱无需使用高浓度酸淋洗液和有机溶剂就可以分离生物胺，且同样可以保证洗脱相近峰如腐胺和尸胺的分离 关键词： 生物胺； 弱酸型阳离子交换柱；抑制型电导检测；积分脉冲安培检测（IPAD）；紫外检测(UV) 生物胺在人类和动物生理学功能上扮演着非常重要的角色，与食品腐败和安全直接相关。从常规饮食中摄入低量生物胺并不危险，但是若摄入量过高则会引起低血压（组胺、腐胺和尸胺）、高血压（酪胺）、偏头痛（酪胺和苯乙胺）、恶心、皮疹、晕眩、心输出量增加，以及呼吸加速。食品在被食用前为了评估其潜在的健康隐患而进行生物胺的测定显得至关重要。 生物胺通常采用反相HPLC，UV或者荧光检测。由于绝大多数生物胺缺少合适的发光和荧光基团，所以需要进行柱前或柱后衍生后才能检测。最常用的衍生试剂包括丹磺酰氯、苯酰氯和o-苯二醛（OPA）。这些衍生步骤在耗费时间、人力的同时还导致了潜在的副产物干扰，使得胺的测得量或高或低。 本文采用IonPac CS18，一种弱酸型阳离子交换柱，与抑制型电导检测、积分脉冲安培检测（IPAD）和紫外检测(UV)联用无需衍生测定肉和奶酪中的生物胺。CS18柱无需使用高浓度酸淋洗液和有机溶剂就可以分离生物胺，且同样可以保证洗脱相近峰如腐胺和尸胺的分离。温和的分离条件使得抑制型电导也可以检测许多未经衍生的生物胺。IPAD对抑制后缺少一个电荷的生物胺同样可以检测，此法已经应用于巧克力中生物胺的测定。UV则可用来确认与其它胺或氨基酸共淋洗的弱保留芳香生物胺的存在和浓度。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Dionex ICS-3000 系统；Chromeleon 6.7 色谱控制软件；搅拌器（家庭和工业强度型）；离心机（Beckman Coulter，Brea，CA）；涡流混合器（Fisher Scientific） 去离子水，I级纯，电阻率大于等于18MΩ·cm； 氢氧化钠，50%（w/w）(Fisher Scientific，SS254-1)； 甲烷磺酸，99%（Dionex公司，P/N 033478） 1.2色谱条件 柱：IonPac CS18 Analytical，2×250 mm (P/N 062878)；IonPac CG18 Guard,2×50 mm(P/N 062880)； 淋洗液*：0–6 min, 3 mM MSA；6–10 min，3–10 mM；10–22 min, 10–15 mM；22–28 min, 15 mM；28–35 min,15–30 mM；35.1–45 min，30–45 mM。 淋洗液源：EG淋洗液发生器单元； 流速：0.30 mL/min；进样体积：5 μL；温度：40℃（下温控室），30℃（上温控室）； 检测方式：** 抑制型电导， CSRS ULTRA (2 mm),Ⅱ外接水自抑制模式，电流设定为40mA，UV-Vis检测设置为276 nm；背景电导: 0.4–0.5 μS； 电导噪音: 0.2–0.3 nS； 系统反压: ~2500 psi 柱后加入法： 检测方式：积分脉冲安培法（IPAD），常规Au电极； 柱后试剂流速：100 mM NaOH，0.24 mL/min； IPAD背景：40–50 nC； IPAD噪音：60–70 pC (没装抑制器)，~210 pC (装抑制器) 在进样前需先用3 mM MSA平衡柱子5min； 本注解中介绍了三种不同的检测配置：IPAD,抑制型电导-IPAD和UV-IPAD 1.3样品前处理 取5 g基本样品到50 mL离心管中，并随后加入20 mL 100 mM MSA提取。使用涡流混合器混匀该混合物1 min，在转速6000 rpm 和4℃条件下离心20 min。倾出上清液，用0.2 μm滤头过滤到50 mL容量瓶中。往离心管中再次加入20 mL MSA，重复进行萃取。上清液过滤到容量瓶中，并用去离子水稀释到刻度。在分析之前，提取液需要与去离子水1：1稀释。 猕猴桃和巧克力（70%可可） 猕猴桃和巧克力样品也是取5 g基本样品到50 mL离心管中，并随后加入10 mL 100 mM MSA提取。样品提取如同菠菜中所提及，但是无需在测定前进行稀释。 黑巧克力和牛奶巧克力 取2 g基本样品到15 mL离心管中，并随后加入4 mL 100 mM MSA提取。使用涡流混合器混匀该混合物1 min，在转速6000 rpm 和4℃条件下离心30 min。倾出上清液，用0.2 μm滤头分