烟草中水溶性糖的连续流动分析方法研究.docVIP

烟草中水溶性糖的连续流动测定方法 李苓、王淑华、李萍、龙杰、崔娅、陈敏毅 云南省烟草质量监督检测站 650106 摘要： 以经典的芒森.沃克法（YC/T32-1996国标法）的测定值作为糖的标准值。用以下两种方法：①用非线性回归方程对连续流动分析仪测定结果作修正；或②用已知浓度的烟末标样标定葡萄糖标准液，再用标定后的浓度值作葡萄糖标液的浓度检测烟样。两种方法的分析结果与经典法结果较吻合，结果令人满意。为自动分析仪操作者提供了有指导意义的分析方法，为制定烟草中水溶性糖的连续流动分析方法标准提供了重要依据。 关键词 水溶性糖 连续流动分析 回归方程 标定 1概 述 自动分析仪测定烟草中水溶性糖的结果较国标法（YC法）偏高2-6%，甚至更高，而仪器分析方法上的差异，又造成同类型的仪器之间的分析结果差异较大而失去可比性和准确性，成为困扰着分析工作者的一大难题。为了解决这一难题，统一分析方法、分析结果，并与国标法结果吻合，两年来我们做了大量试验，改进分析路线、寻找最佳方案。我们首先用国标法和仪器法多次测定了含糖量约在2--35%之间的25个烟叶样品。以国标法结果为标准值，仪器法结果为测定值，经化学计量学优选，制定非线性回归方程经验公式，对仪器法测定值进行修正，结果较满意，但此法计算较复杂。 后来考虑用一个经过多次国标法测定，得到准确浓度的烟末样品作标准样品，用此样品对纯葡萄糖液进行标定。此法来源于标准加入法，在与被测样相同或相近背景下制作标准曲线，再用此标准曲线测定样品。在此情况下，样品中可能造成测定干扰的背景被扣除了，减少了干扰造成的误差。但在自动分析仪上直接使用标准加入法，操作较复杂，达不到快速分析的目的。所以使用烟末来标定纯物质标液（简称烟末标定法），即纯物质标液的标定值已经带有了烟末背景。再用这些标液去测定其他样品，测定过程中就间接地扣除了背景。其思路与标准加入法是一致的。不直接使用烟末作标准是因为烟末配成的标液有效期很短，纯物质标液有效期可达半年，并且此法简单易行，结果也较好。 2实验部分 2.1主要仪器及试剂 ALLIANCE INTEGRAL自动分析仪（法国） 葡萄糖 无水碳酸钠（0.25mol/L） 盐酸（0.5 mol/L） 新亚铜 冰醋酸 2.2实验方法 2.2.1国标法与回归法的试验 制备含糖量约从2—35%的烟叶样品25个，低温、干燥保存。分别用国标法和仪器法测定至少5次，每次不少于2个平行样。如有超差的数据应重新复查。分别以两种方法结果的平均值作为标准值和检测值。在计算机中进行计算优选，得到回归方程。 总糖回归方程： ln（YC）=1.00933ln（仪器）-0.164745 仪器法测定结果20%时: ln（YC/0.96）=1.00933ln（仪器）-0.164745 还原糖回归方程: ln（YC）=1.01256ln（仪器）-0.184955 仪器法测定结果26%时: ln（YC/0.96）=1.01256ln（仪器）-0.184955 选择不同浓度的十个样品用以上两种方法测定,结果见表1.、表2.。 2.2.2烟末标定法 选择前述国标法已测的25个烟样中浓度适宜的一个烟样作标样。称取适量按仪器样品处理方法制备样液（母液），分别取不同体积的母液用5%醋酸配制5个浓度梯度的标液。其浓度为国标法测定的总糖和还原糖的值，在仪器上测定用同样方法配制的5个纯葡萄糖标液，其测定值作为校正后的葡萄糖标液浓度，至此标定结束，可用此系列葡萄糖标液测定样品，经大量数据统计计算得：仪器法测定总糖20%时乘0.94；还原糖21%时乘0.97，结果与国标法较吻合。见表1、表2。 2.2.3回收率实验 分别用标准加入法测国标法及两种校正方法的回收率，结果见表3。 2.3.4不同萃取体积不同萃取时间试验 称取BD3样品0.3g多份，分别加入25、50、100ml 5%醋酸，做不同萃取时间试验（20、30、40、50、60min）。以国标法测定值为准，仪器用校正方法2测定糖含量及萃取率，以选择既省试剂又省时间的分析方案，结果见表4。（国标法测定BD3还原糖为16.50%） 3试验结果 表1. 两种校正方法与国标法测定总糖结果对照 方法 编号 仪器法结果% 国标法结果% 回归法 烟末标定法 结果% 偏差 结果% 偏差 1 7.28 6.74 6.29 -0.45 6.62 -0.12 2 11.90 10.08 10.33 +0.25 10.68 +0.60 3 15.21 13.99 13.23 -0.76 13.58 -0.41 4 18.24 15.84 15.89 +0.05 16.24 +0.40 5 24.10 19.77 20.21 +0.4