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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
学习目标
研究培养基对微生物的选择作用,进行微生物数量的测定。
重点与难点
重点:对土样的选取和选择培养基的配制。
难点:对分解尿素的细菌的计数。1.尿素只有被 分解成 之后,才能被植物吸收利用。
2.以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象,要达到的两个主要目的是:
⑴ ;⑵ 。
3.PCR( )是一种在体外将 。此项技术的自动化,要求使用耐高温的DNA聚合酶。
思考:怎样找耐高温的酶呢?
4.实验室中微生物的筛选应用的原理是:人为提供有利于 生长的条件(包括 等),同时抑制或阻止其他微生物生长。
5.选择培养基是指 。
6.常用来统计样品中活菌数目的方法是 。即当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的 。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在
的平板进行计数。另外, 也是测定微生物数量的常用方法。
7.比较教材中两位同学的操作方法,哪位同学的结果接近真实值?你认为这两位同学的实验需要改进呢?如需要,如何改进?
8.一般来说,统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。这是因为
。因此,统计结果一般用 而不是活菌数来表示。
9.设置对照实验的主要目的是 ,提高实验结果的可信度。
10.对照实验是
。
11.实验设计包括的内容有: 、 、 和 ,具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。
12.不同种类的微生物,往往需要不同的培养 和培养 。在实验过程中,一般每隔24小时统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以
。
13.无菌操作应注意什么问题?
⑴
⑵
⑶
14.在进行多组实验过程中,应注意做好标记,其目的是 。
思考:应标记哪些内容?怎样操作更有利于实验的进行?
15.对所需的微生物进行初步筛选,只是分离纯化菌种的第一步,要对分离的菌种进行一步的鉴定,还需要借助 的方法。
思考:有哪些方法可以对菌种进行鉴定?
【疑难点拨】
12.如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数?
统计某一稀释度下平板上的菌落数,最好能统计3个平板,计算出平板菌落数的平均值,然后按课本旁栏的公式进行计算。
3.为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度?测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围相同吗?
这是因为土壤中各类微生物的数量(单位:株/Kg)是不同的,例如在干旱土壤中的上层样本中:好氧及兼性厌氧型细菌数约为2185万,放线菌数约为477万,霉菌数约为23.1万。因此,为获得不同类型的微生物,就需要按不同的
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