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本节主要内容 第六章 工业微生物生产菌筛选 第一节 采样和富集培养 第二节 纯种分离和筛选 第六章 工业微生物生产菌筛选 发酵工业 微生物产生的各类药理活性物质分类统计 今日话题 中国发酵工业调查 菌株的分离和筛选 菌株的分离和筛选过程总体上可分为两个大部分：一是从自然界分离所需要的菌株；二是把分离到的野生型菌株进一步纯化并进行代谢产物鉴别。 工业生产用菌种的来源 1 向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中进一步筛选我们需要的菌株。 2 从一些发酵制品中分离筛选。 3 由自然界采集样品，如土壤、水、植物枝叶等，从中分离筛选到符合要求的菌株。 菌株的分离和筛选过程通常分为五个主要步骤 1 采样； 2 富集； 3 分离； 4 筛选； 5 鉴别。 一、采样 (1) 从土壤中采样 自然界中含菌样品极其丰富，空气、水、土壤、还有动植物体内都含有各种各样的微生物。其中以土壤中数量和种类最多。 但是各种微生物由于生理特性不同，在土壤中的分布是随着地理条件、养分、水分、土质、季节而有很大的变化，要根据分离筛选的目的不同，到相应的地方去采集土壤样品。 影响土壤中微生物分布的因素 1 土壤有机质 2 通气状况 3 土壤酸碱度 4 植被状况 5 地理条件 6 季节变化 1 土壤有机质 一般耕作土、菜园土、近郊土壤中有机质丰富，土壤成团粒结构，通气保水性能好，营养充足，微生物生长旺盛，数量多，尤其适合细菌和放线菌的生长。 山坡上的森林土，枯枝落叶多，植被厚，有机质丰富，加上遮阴潮湿，适合霉菌和酵母菌生长。 沙土、无植被的山坡土、新恳植的生土、贫瘠土等，微生物数量比较少。 微生物在土壤中的纵向分布 由于阳光中的紫外线有杀菌作用，加上照射会使土壤表层的水分蒸发，所以即使有机质分布很均匀的土壤，其中的微生物在纵向的分布也是不同的。 2 通气状况 好氧的微生物一般分布在土壤的表层或接近表层的地方，厌氧的微生物一般分布在深土层。 土壤的通气状况与土壤中有机质和水分的含量以及土壤颗粒的结构等有关。 3 土壤酸碱度 偏碱的土壤（pH7.0~7.5）适合细菌和放线菌的生长和繁殖。 偏酸的土壤（pH7.0以下）适合霉菌和酵母菌的生长和繁殖。 4 植被状况 植被状况对微生物的分布也有很大的影响。 例如： 果树下的土壤酵母菌比较多。 番茄地或腐烂番茄堆积处有较多的维生素C产生菌。 豆科植物的植被下，根瘤菌的数量比其他植被下占优势。 在落叶松下可以长多种的真菌。 5 地理条件 南方土壤比北方土壤中微生物数量和种类都要多得多。主要原因是南方温度高，温暖季节长，雨水多，相对湿度高，植物种类多，植被覆盖面积大，土壤有机质丰富，土质肥沃，特别适合各种微生物的生长，尤其是霉菌和酵母菌的生长。 6 季节变化 冬季：温度低，气候干燥，微生物生长繁殖缓慢或不繁殖，数量少。 春季：气温逐渐升高，微生物生长旺盛，数量逐渐增加，但南方的春季雨水比较多，土壤的通气状况不好，会影响微生物的繁殖。 夏季和秋季：这是温度比较高的两个季节，雨水和土壤通气等也都能保持相当长的稳定状况，此时，微生物数量比任何时候都多，因此秋季采样是最理想的。 （2）根据微生物生理特点采样 粮食加工场所容易分离到产生淀粉酶、糖化酶的菌株。 在油田附近易筛森林中有很多枯枝落叶和腐烂的木头，特别适合利用纤维素做碳源的纤维素酶产生菌的生长。 在肉类加工厂和饭店的排水沟内有很多腐烂的肉类、豆类和花生等，肯定有很多能分解有机氮的蛋白酶产生菌存活。 在面粉厂、糕点厂、酒厂、淀粉加工厂等场选到利用碳氢化合物为碳源的菌株。 （3）局部环境条件的影响 微生物分布除了本身的生理特性和环境条件综合因素的影响之外，还受到局部环境条件的影响。 例1：北方气候寒冷，年平均气温很低，高温微生物相对很少，但该地区的温泉或堆肥中，却会出现为数很多的高温菌。 例2：氧气充足的土层中按理只适合好氧菌的生长，但实际上也有一些厌氧菌能在此存活，原因是由于好氧菌的生长繁殖，消耗了土层中大量氧气，为厌氧菌穿早了局部缺氧的有利环境。 微生物采样的原则 1 根据微生物生理特点采样。 2 根据微生物生长环境采样。 3 特殊性能的微生物要到特殊的环境中去寻找。 （4）采样方法 用取样铲将表层土除去，取5~25cm（10~30cm）的土样10~15g，装入事先准备好的塑料袋中。 编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。 一般情况，采样后应立即进行分离，以免微生物死亡，但有时微生物样品较多，或路途遥远，难以及时分离，则采取事先准备装有选择性培养基的试管若干，随身带着，取样后，及时地接种的斜面上，防止微生物死亡。 二、富集培养 富集培养：是根据微生物生理特点，设计一种选择性培养基，取土壤、水等样品少许加入到培养基中，给目的微生物创造一个最适的生长环境，经过一定时间的