病理学观察小鼠原发性干燥复合症模拟的眼表体征及发病机制研究.docVIP

病理学观察C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠原发性干燥复合症模拟的眼表体征及发病机制研究 关键词： HYPERLINK /%B8%C9%D4%EF%D7%DB%BA%CF%D5%F7_itemkey.html \t /blx/2014/0812/_blank 干燥综合征? HYPERLINK /%B8%C9%D1%DB_itemkey.html \t /blx/2014/0812/_blank 干眼? HYPERLINK /C57BL/6.NOD-Aec1Aec2+%D0%A1%CA%F3_itemkey.html \t /blx/2014/0812/_blank C57BL/6.NOD-Aec1Aec2 小鼠? HYPERLINK /%D1%D7%D6%A2_itemkey.html \t /blx/2014/0812/_blank 炎症? HYPERLINK /%D7%E9%D6%AF%B2%A1%C0%ED%D1%A7_itemkey.html \t /blx/2014/0812/_blank 组织病理学? 前 言??干燥综合征(sj?gren syndrome，SS)是临床常见的自身免疫性疾病，根据是否伴有其他组织器官受累，可分为原发性干燥综合征和继发性干燥综合征，其主要病理改变是淋巴细胞浸润泪腺和涎腺，引起眼干和口干。干燥综合征属于水样液缺乏型干眼。?近年来，研究者设计了多种动物模型探讨干眼的发病机制，包括通过干燥环境应激、泪腺切除、基因敲除、东莨菪碱注射等方法，诱导动物产生干眼病。研究发现：炎症和高渗透压是干眼发生发展的核心因素。干眼小鼠及干眼患者的泪液、眼表组织中炎性因子表达明显增多，包括Th1细胞(T helper cell1)、Th2细胞(T helper cell 2)及 Th17细胞(T helper cell 17)相关的细胞因子。临床研究亦发现，局部抗炎药物治疗可以改善干眼患者的眼部不适症状，明显提高患者生活质量。同时，调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)的数量减少和(或)抑制效应性T细胞增殖能力的下降可能参与了干眼的发生发展。尽管上述动物模型能够模拟出泪液分泌减少、角膜上皮脱落及结膜杯状细胞减少等干眼体征，但是制作程序复杂、耗时长及不稳定，故难以模拟人干眼缓慢发病、逐渐加重、反复发生的临床特点。?非肥胖型糖尿病(Nod-obesity diabetes，NOD)小鼠是人自身免疫性糖尿病模型小鼠。研究发现，该小鼠染色体上存在19个糖尿病易感基因位点参与糖尿病发病，而其中的2个染色体位点即 Idd3(位于3号染色体上)和 Idd5(位于1号染色体上)为干燥综合征易感基因位点。Cha等将NOD小鼠与C57BL/6J小鼠(对干眼不易感)先相互杂交后，再近交多代，得到只含有Idd3和Idd5两个疾病易感基因位点的小鼠，即C57BL/6.NOD-Aec1Aec2 小鼠。.........................1.2组织病理学变化和干眼的发生机制Nguyen等通过免疫组化染色和实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)的研究方法，发现该小鼠涎腺在出生后第4周龄、第8周龄时与正常小鼠无显著差异，至第12 周龄时开始发生涎腺炎，伴随炎症因子白介素-17(Interleukin 17, IL-17)、白介素-23(Interleukin, IL-23)等表达增加；至第16周龄时涎腺组织中淋巴细胞浸润及炎性因子表达至高峰，伴随涎腺腺体结构破坏和唾液分泌减少。由此可见，C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠可以自发地产生涎腺炎，但是其能否自发地产生泪液分泌减少、结膜杯状细胞数目减少及角膜上皮表面微绒毛密度降低等干眼改变，目前尚未见系统报道。?我们拟从以下三个方面进行研究：?1.采用空腹血糖值检测、泪液分泌试验 I (Schirmer Test I, SIt )及眼表染色的方法，观察 C57BL/6.NOD-Aec1Aec2 小鼠的眼表体征变化；?2.采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、过碘酸-希夫(periodic? acid-schiff, PAS)染色及扫描电镜(scan electron microscopy, SEM)检查方法, 检测中央角膜上皮厚度及结膜杯状细胞数目，观察小鼠泪腺、角膜上皮细胞表面的组织病理学变化；3.采用免疫组化染色(immunohistochemistry, IHC)及半定量逆转录聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription