第四节 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的含量测定.docVIP

第四节 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的含量测定 一、亚硝酸盐测定(格里斯试剂比色法) (一)目的 熟悉食品中亚硝酸盐的卫生标准，掌握食品中亚硝酸盐含量测定的基本方法。 (二)原理 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在与N-1-萘基乙二胺偶合形成紫红色染料后，与标准比较定量。 (三)试剂 实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。 1．氯化胺缓冲液：1L容量瓶中加入500ml水，准确加入20.0ml盐酸，振荡混匀，准确加入50ml氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。 2．0.42mol/L硫酸锌溶液：称取120g 硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀释至1000ml。 3．20g/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。 4．对氨基苯磺酸溶液：称取10g 对氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。 5．0.1% N-1-萘基乙二胺溶液：称取0.1g N-1-萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。 6．显色剂：临用前将0.1% N-1-萘基乙二胺溶液和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。 7．亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，加100ml氯化胺缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。 8．亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00ml，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg亚硝酸钠。 (四)仪器 1．小型粉碎机 2．分光光度计 (五)操作方法 1．样品处理 称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70ml水和12ml 2%氢氧化钠溶液，混匀，用2%氢氧化钠溶液调样品至pH8，定量转移至200ml容量瓶中加10ml硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5ml氢氧化钠，混匀。置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20ml，收集滤液备用。 2．亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml亚硝酸钠标准使用液(相当于0，2.5，5，10，15，20，25μg亚硝酸钠)，分别置于25ml带塞比色管中。于标准管中分别加入4.5ml氯化胺缓冲液，加2.5ml60%乙酸后立即加入5.0ml显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯)，以零管调零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。 低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml亚硝酸钠标准使用液（分别相当于0，2，4，6，8，10μg亚硝酸钠）。 3．样品测定：吸取10.0ml上述滤液（样品处理滤液）于25ml带塞比色管中，其它操作同上。 (六)结果计算? X1 = （m2 × 1000）/[ m1 × （V2/V1）×1000] 式中：X1－样品中亚硝酸盐的含量，?mg/kg； m1－样品质量，g； m2－测定用样液中亚硝酸盐的质量，μg； V1－样品处理液总体积，ml。 V2－测定用样液体积，ml。 结果的表述应报告算术均数的二位有效数。 ? 二、硝酸盐测定 (一)目的 熟悉食品中硝酸盐的卫生标准，掌握食品中硝酸盐含量测定的基本方法。 (二)原理 样品经沉淀蛋白质除去脂肪后，溶液通过镉柱或加入镉粉，使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，在弱酸性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N-1-萘基乙二胺偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。 (三)试剂 1．硫酸镉溶液(0.14mol/L)：称取37g硫酸镉(CdSO4·8H2O)，用水溶解，定容至1L。 2．0.1mol/L盐酸溶液：吸取8.4ml盐酸，用水稀释至1L。 3．硝酸钠标准溶液：准确称取500.0mg于110～120℃干燥恒重的硝酸钠，加水溶解，移入500ml容量瓶中，加50ml氯化胺缓冲液，用水稀释至刻度，混匀，在4℃冰箱中避光保存。此溶液每毫升相当于1mg的亚硝酸钠。 4．硝酸钠标准使用液：吸取硝酸钠标准溶液1.00ml，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，临用时现配。此溶液每毫升相当于10μg硝酸钠。 5．氯化胺缓冲液、亚硝酸钠标准使用液、显色剂：配制方法见亚硝酸盐测定。 6．镉柱(镉粉) 海绵状镉粉的制备：于500ml硫酸镉溶液中，投入足够的锌棒，经3～4h，当其中的镉全部