家族性急性髓系白血病差异表达基因的筛选_医学论文.docVIP

家族性急性髓系白血病差异表达基因的筛选_医学论文 家族性急性髓系白血病差异表达基因的筛选_医学论文 作者：王少元， 张轶文， 王程毅 【摘要】 目的建立简便可靠的非同位素杂交筛选方法，筛选家族性急性髓系白血病cDNA消减文库中的差异表达基因。方法用地高辛（DIG）标记消减文库cDNA作为探针，通过差异筛选技术进行差异表达片段的筛选，杂交阳性结果经RT再度验证。结果DIG标记探针浓度为250～500 pg/μL，效率为48%～96%，并且杂交信号清晰，重现性好。应用DIG标记探针改良的差异筛选技术所得到的阳性结果经RT验证符合率达到86%。结论采用DIG标记探针具有高度的灵敏度和良好的特异性，可避免放射性污染，简化实验操作，可作为替代同位素32P标记探针的方法。 【关键词】 系谱,白血病； 急性病； 基因表达； 地高辛； DNA，互补； 基因文库 经抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization，SSH）技术构建的cDNA消减文库，包含着丰富的差异表达信息，是研究疾病发生发展分子机制的重要信息来源。但是，如何从浩瀚的信息库中筛选出有价值的差异表达基因，要求有一种简便、实用、快速、可靠的筛选技术，该技术不仅要有高效的筛选效率，而且应具有高度的灵敏度和特异性，同时操作不能繁琐，可在普通实验室开展。因此，笔者建立地高辛（digoxin，DIG）