当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞乳酸脱氢酶活性的影响_药学论文.docVIP

当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞乳酸脱氢酶活性的影响_药学论文 当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞乳酸脱氢酶活性的影响_药学论文 【摘要】 目的：观察当归对缺血再灌注损伤心肌组织中乳酸脱氢酶(LDH)活性，探讨当归抗心肌缺血再灌注损伤保护作用的机理。方法:将30只SD大鼠随机分成3组(每组n=10) :假手术组(Ⅰ组)、缺血再灌注组(Ⅱ组)和当归治疗组(Ⅲ组) ,建立在体心肌缺血再灌注动物模型。实验完毕后，将各组动物心肌组织做组织化学染色，观察各组动物心肌细胞内乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化。利用HPIAS2000图像分析系统测定LDH在以上3组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：当归治疗组心肌细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性反应物呈颗粒状,均匀分布于肌膜下或肌丝区之间, 颗粒呈深紫色, 表示酶活性很强；假手术组酶反应物呈浅紫色细小颗粒状，肌膜下或肌丝区之间可见少量的紫色颗粒，分布较稀疏，表示酶活性较弱；缺血再灌注损伤组乳酸脱氢酶(LDH)反应物极弱，几乎未见酶活性表达。图像分析结果显示当归治疗组与假手术组和缺血再灌注损伤组之间乳酸脱氢酶(LDH)活性的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(0.01)；假手术组与缺血再灌注损伤组之间乳酸脱氢酶(LDH)活性的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性意义(Pgt;0.05)。结论：当归注射液对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞有重要的保护作用。 【关键词】 当归注射液； 缺血再灌注； 心肌； 乳酸脱氢酶(LDH)　　目前虽然对缺血或缺血再灌注损伤的确切机制还不十分清楚,但已经知道损伤的临床结局主要就是细胞死亡。细胞死亡有两种形式:一种是坏死,另一种是凋亡。凋亡(apoptosis) 是细胞在基因调控下的主动性死亡,不引起炎症反应。持续缺血和缺血再灌注时心肌组织都可发生细胞凋亡。已经证实,人类心肌梗死除细胞坏死外,细胞凋亡也参与了梗死的病理过程,细胞凋亡不仅影响梗死面积,而且促成心脏结构的重构,心肌梗死的早期和晚期均存在凋亡现象。当归为伞形科植物当归Angelicasinennsis(Oliv.)Diels的干燥根，味甘、辛,性温，能补血和血,调经止痛,润燥滑肠。有文献报道［1］，当归对冠心病患者有平衡和抑制血小板聚集的作用，因而能明显改善胸痛、胸闷等临床症状和心电图缺血性ST的变化, 是治疗冠心病的有效药物［2］。但当归对缺血再灌注损伤心肌细胞结构的影响，目前国内外未见报道。本研究采用组织化学方法，探讨当归抗心肌缺血再灌注损伤保护作用的机理。 　　1 材料与方法 　　1动物模型制备及分组健康雄性SD大鼠（SPF级）30只,体重250～300g 左右，由武汉大学医学院动物试验中心提供。腹腔注射戊巴比妥钠4.5 mg·(100 g)-1 ,麻醉动物后行气管切开接微型呼吸机人工呼吸（呼吸频率60次·min-1 ,潮气量2ml·(100g)-1,微型呼吸机由第二军医大学生产）,沿胸骨左缘第4 肋骨开胸在左心室、右心室与左心房交界处结扎/ 开放左冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注模型。将动物随机分成3组(每组n=15):假手术组(Ⅰ组) ,丝线穿过冠状动脉前降支但不结扎；缺血再灌注组( Ⅱ组) ,缺血再灌注前5min 腹腔注射生理盐水0.8 ml·(100 g)；当归治疗组( Ⅲ组),缺血再灌注前5min 腹腔注射当归注射液0.8 ml·(100g)-1 。每组5只动物缺血30min再灌注40min ,10只动物缺血30min 再灌注120min。在缺血再灌注开始前, 经舌静脉注射伊文氏蓝, 缺血40min后心尖无蓝色且呈乌红部分为缺血区,再灌注120min 后心肌经TTC处理后心尖为白色部分为梗死区。 　　1主要试剂　25%当归注射液(武汉大学中南医院制药厂,批号为970118)。 　　1标本制作及观察① 取新鲜组织冰冻切片；② 切片入下液作用5～30min 0.5 M乳酸钠 6ml 1.5%乳酸脱氢酶水溶液 2ml 0.2M磷酸缓冲液pH7.4 10ml 蒸馏水 6ml③ 生理盐水稍洗；④ 10%甲醛盐水固定10min；⑤ 15%酒精稍洗1min；⑥ 生理盐水稍洗；⑦ 甘油明胶封片。 　　1图像分析采用HPLAS高清晰度彩色病理图文报告管理系统对酶活性表达进行定量分析,每张切片随机选取5个高倍镜视野(×400),测定乳酸脱氢酶(LDH)每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。 　　1统计学处理用SPSS11.5软件对各组乳酸脱氢酶(LDH)反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和ＳＮＫ(ｑ)检验,检验水准α为0.05。 2 结果 　　2光镜观察假手术组可见心肌细胞呈短圆