流式检测讲座.ppt

单核细胞 细胞分析的瓶颈？？？ 如何进一步分析和计数这三群细胞内更精细的细胞亚群？ 如何进一步分析和计数各种非造血系统细胞？ 淋巴细胞 粒细胞 这三群细胞分别由具有不同功能的细胞组成 这些细胞数量不等，甚至非常稀少 这些细胞表达不同的标记物，是用来区分它们的基础 淋巴细胞 单核细胞 粒细胞 艾滋病人 CD4细胞 总 T细胞 CD4+ T细胞 绝对计数值 绝对计数值 蛋白表达强度 相对计数值 24小时后 6小时内 三、流式细胞仪应用 （一）免疫细胞测定 淋巴细胞亚群（T，B，NK） 活化的淋巴细胞（活化标记） 有功能的淋巴细胞（细胞因子分泌功能） 抗原特异性淋巴细胞 调控性免疫细胞 抗原递呈细胞 先天免疫细胞 嗜碱性粒细胞 Th17细胞 CD4 / IL-17 CTL细胞 CD8 Treg细胞 CD4CD25 FoxP3 Th2细胞 CD4 / IL-4 Th1细胞 CD4 / IFN T细胞 CD3 外周血淋巴细胞亚群临床意义 疾病 CD3 CD4 CD8 CD4/CD8 NK 自身免疫病 降低 增高 降低 降低 AIDS 降低 严重降低 增高 降低 SARS 降低 降低 降低 降低 降低 慢性活动性肝炎、肝硬化 降低 正常或增高 降低 降低 肿瘤 降低 降低 增高 降低 降低 外周血淋巴细胞亚群临床意义 纯粹看单次的检测结果和横向比较或与参考值比较可能意义不大 更多的实验室在普通淋巴细胞亚群检测中开始重视单个病人不同时期的细胞数量的变化趋势的意义 多个细胞免疫细胞参数同时检测综合观察 新功能细胞检测 免疫细胞检测临床重要性 病人细胞免疫功能 治疗效果和预后 临床药理研究和新药临床前评估（中药应用前景广泛） 细胞生物治疗 HIV感染患者CD4+细胞的绝对计数 HIV入侵人体的目标细胞是CD4 T细胞，感染后期能严重破坏T细胞，引起CD4细胞的减少 CD4细胞的计数是诊断、疗效观察和预后的最重要指标 CD4细胞绝对数量如果低于200细胞/ul，表明疾病将进入重症期 国家CDC 2005年以来采购了100多台流式细胞仪来配合艾滋病关爱工程和实现对世界的承诺 江西胸科医院检验科 江西胸科医院检验科 王彩纹于2011年01月 王彩纹于2011年01月 王彩纹于2011年01月 王彩纹于2011年01月 王彩纹于2011年01月 流式细胞术原理和应用 王彩纹 Tel E_mail:Wangc_ 一、淋巴细胞 淋巴细胞简介 淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体，其显著特征是其异质性，可分为许多表型和功能均不同的群体：T、B、NK等。 T细胞亚群 T淋巴细胞（T细胞） 胸腺依赖性淋巴细胞 （thymus- dependent lymphocyte） 外周血：约占淋巴细胞总数的65%～75% 胸导管：高达95%以上 T细胞亚群及其功能 分类 按表达TCR类型不同 按表达的CD分子不同 CD4+T细胞 CD8+T细胞亚群 按功能不同 辅助性T细胞 (Th) 细胞毒性T细胞 (CTL或Tc) 调节性T细胞 (Tr或treg) 按对抗原应答所处状态不同 初始T细胞 活化T细胞 记忆性T细胞 Th的亚群（根据CK产生种类和功能） TH1细胞 主要分泌IL-2、IFN- γ 和TNF-β。 作用：参与细胞免疫。 TH2细胞 主要分泌IL-4、5、10和IL-13 。 作用：协助、促进B细胞分化、增殖，产生抗体，参与体液免疫。 CD4+ Th细胞的功能 Tc细胞（细胞毒性T细胞，CTL） 特 点：胞浆内含颗粒（穿孔素、颗粒酶）。 作 用: 特异性杀伤肿瘤和病毒感染细胞。 机 制： （1）颗粒外排（穿孔素，颗粒酶，颗粒溶解素） （2）Fas/FasL途径诱导靶细胞凋亡。 CD8+ Tc细胞的功能 CD45 白细胞共同抗原 蛋白酪氨酸磷酸酶，参与T细胞活化启动 与CD4、CD8分子结合 CD45RA—未致敏T细胞 CD45RO—效应T、记忆T细胞 二、流式细胞仪工作原理 流式细胞仪与细胞组学 细胞相对定量（％） 细胞绝对定量（细胞/ul） 细胞膜蛋白表达定量（蛋白分子/细胞） 可溶性蛋白绝对定量（g/ml） 1、 液流系统 2、 光学系统 3、 数据处理系统 一、流式细胞仪的基本结构 由样本和鞘液组成 待测细胞 单个细胞的悬液 荧光染料标记的单抗对其染色 受清洁气体压力 从样品管进入流动室形成样本流 鞘液