拮抗TGFβ1可抑制胚胎干细胞来源BLCFC的产生和分化_医学论文.docVIP

拮抗TGF可抑制胚胎干细胞来源BL的产生和分化_医学论文 拮抗TGF可抑制胚胎干细胞来源BL的产生和分化_医学论文 作者：要晖宇 刘兵 王晓燕 毛宁【摘要】 　　胚胎干细胞来源的BL体外可分化产生造血和内皮细胞。为了研究TGF对BL产生和分化的调控作用，在拟胚体培养阶段施加TGF和TGF中和抗体，观察不同阶段TGF对BL的数目及其定向内皮和造血细胞分化能力的影响。结果表明：在拟胚体培养阶段拮抗TGF的作用可显著降低BL的数量(0.01)；与之吻合的，中和TGF后拟胚体中Flk细胞比例降低。此外，在拟胚体培养阶段加入TGF可显著增强BL的造血和内皮细胞分化能力，而中和TGF后分化能力降低。结论： TGF对BL的产生和分化发挥正向调节作用。 【关键词】 TGF；BL；胚胎干细胞 　　 Reduction of Blast Abstract To study the regulation of TGFβ1 on the development of hemangioblast, embryonic stem cellderived blast forming cells (BLCFC) were used as the model of hemangioblast in vitro. TGFβ1 or antiTGFβ1 neutralization antibody was added in the medium of embryoid body (EB) generation for observating influence of TGFB1 addition in different culture stages on number of BLCFC and differentiation of BLCFC to endothelial and hematopoietic cells. The results showed that antagonizing TGFβ1 in the course of EB growth could significantly reduce the number of BLCFC (0.01), and the frequency of Flk1+ cells was also decreased consistently. Furthermore, the BLCFC derived from EB pretreated with TGFβ1 demonstrated remarkably elevated hematopoietic and endothelial potential, whereas such bipotential was impaired in the group with neutralizing antibody. It is concluded that TGFβ1, a conventional negative regulator in hematopoiesis and angiogenesis exert positive effects on the development and differentiation capacities of BLCFC in vitro. Key words TGFβ1； BL； embryonic stem cells 胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESC) 来源的BL的检测是研究成血血管细胞(hemangioblast)的主要体外模型，已经为阐明某些转录因子和细胞因子在成血血管细胞发育中的调控作用提供了有效的途径［1,2］。普遍的观点认为，TGF是成体造血和内皮细胞增殖的抑制因子；TGF－/－小鼠卵黄囊造血和内皮系统的发育异常也表明其在胚胎早期发育中对于中胚层细胞分化、卵黄囊血管发生极为重要。此外，TGF可体外诱导鸟类体壁中胚层细胞分化的同时产生造血和内皮细胞，提示其在成血血管细胞发育中具有重要作用。最近的研究证明，TGF信号通路下游分子Smad5基因敲除的ESC中BL数量明显高于野生型［3］。因此，TGF对成血血管细胞发育的调控值得深入研究。 材料和方法 细胞因子及抗体 重组人血小板生成素(rhTPO)、小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、小鼠血管内皮生长因子(VEGF)、小鼠干细胞因子(SCF)、小鼠白介素－3 (IL、 重组人白介素、 小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM）、小鼠胰岛素样生长因子(IGF均为PeproTech公司产品。小鼠白血病抑制因子(mLIF)为Chemicon公司产品。重组人促红细胞生成素(rhEpo)为