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改变部分TIR对EPO模拟肽8串联体表达的影响_医学论文 改变部分TIR对EPO模拟肽8串联体表达的影响_医学论文 作者：韩苇　颜真　王俊楼　赵永同　石继红　张英起 【关键词】 翻译起始区域 　　关键词: 翻译起始区域SD序列EPO模拟肽基因串联体 　　摘 要:目的 通过改变部分翻译起始区序列观察对EPO模拟肽基因8串联体表达的影响. 方法 设计和人工合成了部分翻译起始区域（translation initiation region，TIR）DNA序列，将该序列插入pBSEPOM8 （含EPO模拟肽基因8串联体序列）的EcoRI和XbaI位点，经DNA测序确定正确重组质粒，再将EPO模拟肽基因8串联体（含改建的翻译起始区域）克隆到pBV220载体的EcoRI和BamHI位点，诱导表达. 结果 DNA测序证明，人工合成的DNA序列已正确插入EPO模拟肽基因8串联体的翻译起始区域.该串联体基因插入pBV220载体后，经42℃诱导，在细菌裂解上清中出现一条相对分子质量为22×103 （Mr ）的新蛋白带，与EPO模拟肽基因8串联体的理论计算分子量相符合.经薄层扫描证明该蛋白带约占细菌蛋白总量的15%. 结论 通过改变部分翻译起始区域起动了EPO模拟肽基因8串联体的翻译，使原来不表达的EPO模拟肽基因8串联体获得了较高水平的表达. 　　Keywords:translation initiation regionSD sequenceEPO mimetic peptidegene multiple repeats 　　Abstract:AIM To observe effect of a synthesized DNA se-quence of translation initiation region（TIR）on expression of8repeats of EOP mimetic peptide gene.METHODS A DNA sequence of translation initiation region was designed，syn-thesized and inserted into EcoRI and XbaI sites of pBSEPOM8　which contained8repeats of EPO mimetic peptide gene.The correct recombinant plasmid DNA was named for pBSE-POM8 B.Then8repeats of EPO mimetic peptide gene which contained synthesized TIR sequence was cloned into EcoRI and BamHI sites of pBV220expression vector.RESULTS DNA sequencing analysis showed that the sequence of syn-thesized TIR was correctly inserted into EcoRI and XbaI sites of pBVEPOM8 B.After recumbent bacterium contained pB-VEPOM8 B was induced at42℃for4h，a new protein band was found on SDSgel.The relative molecule mass of the new protein band was about22000（Mr ），consistent with8repeats of EPO mimetic peptide.The protein band amount-ed to15%of total bacteria protein.CONCLUSION Synthe-sized DNA sequence of TIR initiates translation of8repeats of EPO mimetic peptide gene，and so helps improve the pre-viously non-expression of the latter. 　　0 引言 　　EPO模拟肽是Wrighton等［1］ 发现的，它是具有EPO生物学功能的小肽.我们已成功地构建和表达了EPO模拟肽基因4串联体，同时也成功地构建了该模拟肽基因8串联体.但后者克隆到pBV220表达载体中，经温度诱导后并未获得表达.一般认为，翻译起始区域（TIR）序列对外源基因翻译的起始影响最大.针对此点，我们重新设计了部分TIR的