新生鼠脑缺血再灌注后海马CA1区突触素的表达及意义_医学论文.docVIP

新生鼠脑缺血再灌注后海马CA1区突触素的表达及意义_医学论文 新生鼠脑缺血再灌注后海马CA1区突触素的表达及意义_医学论文 作者：宋文秀，曹云涛，刘华庆 【关键词】 脑缺血 　　【Abstract】 AIM: To observe synaptophysin（Syp）expression in hippocampal CA1 region of 7dayold Wistar rats after cerebral ischemiareperfusion. METHODS: Immunohistochemical method was used to measure the expression of Syp in the hippocampal CA1 region after reperfusion. RESULTS: The expression of Syp in hippocampal CA1 region in cerebral ischemiareperfusion group increased at 3 d after reperfusion and reached the highest level at 7 d. The corrected optical density（COD） value was significantly higher than that in the shamoperation group (0.01). CONCLUSION: Neural plasticity occurrs at 3 d and continues to 14 d after cerebral ischemiareperfusion in newborn rats. Syp is a good index indicating the regeneration of neuron and nervous axons. 　　【Keywords】 cerebral ischemia synaptophysin hippocampal CA1 region rats, Wistar, animals, newborn 　　【摘要】 目的： 观察新生Wistar大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区突触素的表达. 探讨中枢神经系统的可塑性. 方法： 应用免疫组化方法观察新生鼠脑缺血再灌注后不同时点脑组织突触素的表达. 结果： 缺血再灌注3 d突触素表达开始增高，7 d达高峰，14 d时免疫活性仍高，其矫正吸光度值与对照组比较有显著性差异（0.01）. 结论： 新生Wistar大鼠脑神经细胞损伤后具有修复的可塑性，其时间持续至缺血再灌注后14 d. 突触素检测能较好地反映神经元和轴突的代偿再生情况. 　　【关键词】 脑缺血；突触膜糖蛋白；海马CA1区；大鼠，Wistar；动物，新生 　　0引言 　　突触素（synaptophysin, Syp）是一种与突触结构和功能密切相关的膜蛋白，Syp作为突触囊泡的一种特异标志性蛋白，其数量和分布密度可间接反映突触的密度［1］，突触重建时其表达明显增多，与神经可塑性密切相关. 近年来，国内外研究［2］发现机体在缺血缺氧时，能反映神经细胞代偿及重塑的Syp的表达和生成增加. 我们旨在研究新生鼠脑缺血再灌注后突触素的变化规律，探讨中枢神经系统的可塑性. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　出生后7 d Wistar大鼠70只（遵义医学院实验动物中心），体质量18～22 g，雌雄不拘，随机分为假手术组和缺血再灌注组，每组35只. 1000 u青霉素ip预防感染， 30 g/L戊巴比妥钠(40 mg/kg) ip麻醉. 抗Syp抗体（即用型）：鼠抗人mAb（DAKO公司）. Mias99B图像分析系统（四川大学图像图形研究所）. 　　1.2方法 　　1.2.1脑缺血模型的制作① 假手术组： 分离动物右侧颈总动脉，不阻断血流；② 缺血再灌注组： 阻断右侧颈总动脉45 min再灌注. 两组均于术后7个时间点即2, 6, 12, 24 h和3, 7, 14 d断头处死动物，每时间点5只，取右侧大脑半球用40 g/L多聚甲醛固定待测. 制模成功标准为结扎右侧颈总动脉后2 h对侧（左侧）肢体活动障碍. 　　1.2.2标本制备及Syp检测采用免疫组织化学Envision二步法. 取标本固定24 h，石蜡包埋，进行海马CA1区、皮层连续冠状切片，片厚4 μm. 切片常规脱蜡和水化，微波抗原修复10 min，室温下自然冷却20 min，蒸馏水漂洗后置于PBS (pH=7.4)中，用30 g/L过氧化氢避光孵育20 min以阻断内源性过氧化物酶，PBS漂洗5 min×3，加20